| 查看: 1077 | 回复: 7 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
蛋白质纯化已有4人参与
|
||
|
大家好，有几个问题向大家请教。 我的蛋白是短肽13KD,大肠表达，纯化流程是SP-HIC-Desalting-Q，由于这个蛋白不稳定，SP结果当蛋白含量高于6mg/ml时4度放置两天就会出现浑浊，HIC由于使用的NaCl（硫酸铵会导致蛋白沉淀），不会出现沉淀，而由于要过Q柱出去内毒素和核酸，所以要脱盐，当浓度高于1mg/ml在20mM PB中就会沉淀，很是头疼。 PS:1. 请问大家在这个实验流程中怎么不让它沉淀， 2. 上柱子的Buffer中是不是可以添加什么东西呢,尤其是脱盐过程，达到不沉淀的目的。 再次谢谢了，由于比较紧迫，请大家支支招吧。 |
回复此楼» 猜你喜欢
2026CSC博士，有机化学，有机方法学，不对称催化
已经有0人回复
-
2026博士申请-药物化学方向（小分子化合物合成）
已经有4人回复
-
药物学论文润色/翻译怎么收费?
已经有148人回复
-
大肠杆菌临床分离菌株ETEC菌株求购
已经有5人回复
-
钯碳氢气还原脱cbz产物伯胺出现甲基化。
已经有2人回复
-
求助《化工原理》第四版 柴诚敬、贾绍义 课件
已经有0人回复
-
酯类化合物柱层析极性较大，使用醇类溶剂，怎么避免酯交换
已经有2人回复
-
求助骆广生微化工技术书籍
已经有1人回复
-
求助冯连芳、张才亮的《聚合过程强化技术》
已经有0人回复
-
2026考博
已经有0人回复
yingshi0703
金虫 (小有名气)
- 应助: 1 (幼儿园)
- 金币: 1677.8
- 散金: 10
- 红花: 1
- 帖子: 61
- 在线: 34.6小时
- 虫号: 1407909
- 注册: 2011-09-19
- 性别: MM
- 专业: 生物化学
3楼2014-04-08 16:05:00
2楼2014-04-08 13:44:27
送红花一朵5楼2014-04-08 20:33:52
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
leezz(星海慧儿代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2014-04-18 09:49:35
leezz: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-04-23 13:16:27
leezz(星海慧儿代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2014-04-18 09:49:35
leezz: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-04-23 13:16:27
| 我们以前实验时可以再蛋白溶液里面加入0.1%的peg防治其高浓度凝聚，不知道对于你的蛋白是不是适用；而看你描述，你的蛋白好像不能离开NaCl环境，就算要上Q柱也并不需要完全除去NaCl啊，可以试下，在低浓度下（如0.05M NaCl或者0.1M NaCl）下会不会沉淀，如果可以，你可以脱盐，也可以直接稀释，一些浅见，希望能有帮助 |
6楼2014-04-17 20:17:59