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leezz

铜虫 (小有名气)

愤青

[求助] 蛋白质纯化 已有4人参与

大家好，有几个问题向大家请教。
    我的蛋白是短肽13KD,大肠表达，纯化流程是SP-HIC-Desalting-Q，由于这个蛋白不稳定，SP结果当蛋白含量高于6mg/ml时4度放置两天就会出现浑浊，HIC由于使用的NaCl（硫酸铵会导致蛋白沉淀），不会出现沉淀，而由于要过Q柱出去内毒素和核酸，所以要脱盐，当浓度高于1mg/ml在20mM PB中就会沉淀，很是头疼。
   PS:1. 请问大家在这个实验流程中怎么不让它沉淀，
         2. 上柱子的Buffer中是不是可以添加什么东西呢,尤其是脱盐过程，达到不沉淀的目的。
再次谢谢了，由于比较紧迫，请大家支支招吧。
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1楼 2014-04-06 12:49:58
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yingshi0703

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
leezz(星海慧儿代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2014-04-08 16:55:20
leezz: 金币+6, ★有帮助 2014-04-10 16:40:47
我们做的是抗体脱盐，buffer中会加点EDTA。不知道和你的一样不~另外，我们做蛋白表达纯化，都保存在-80度，若浓度太大，在4度保存就容易沉降。
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停留在那年夏天的风~
3楼2014-04-08 16:05:00
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zengxr

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
leezz(星海慧儿代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2014-04-08 16:55:08
脱盐，你可以用纳滤膜试一试
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2楼2014-04-08 13:44:27
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leezz

铜虫 (小有名气)

愤青
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by gfshksdl at 2014-04-08 16:24:32
抗体脱盐

一种短肽，脱盐就沉淀
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5楼2014-04-08 20:33:52
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xwb0411422

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
leezz(星海慧儿代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2014-04-18 09:49:35
leezz: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-04-23 13:16:27
我们以前实验时可以再蛋白溶液里面加入0.1%的peg防治其高浓度凝聚，不知道对于你的蛋白是不是适用；而看你描述，你的蛋白好像不能离开NaCl环境，就算要上Q柱也并不需要完全除去NaCl啊，可以试下，在低浓度下（如0.05M NaCl或者0.1M NaCl）下会不会沉淀，如果可以，你可以脱盐，也可以直接稀释，一些浅见，希望能有帮助
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2014-04-17 20:17:59
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