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蛋白质纯化 已有4人参与
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大家好，有几个问题向大家请教。 我的蛋白是短肽13KD,大肠表达，纯化流程是SP-HIC-Desalting-Q，由于这个蛋白不稳定，SP结果当蛋白含量高于6mg/ml时4度放置两天就会出现浑浊，HIC由于使用的NaCl（硫酸铵会导致蛋白沉淀），不会出现沉淀，而由于要过Q柱出去内毒素和核酸，所以要脱盐，当浓度高于1mg/ml在20mM PB中就会沉淀，很是头疼。 PS:1. 请问大家在这个实验流程中怎么不让它沉淀， 2. 上柱子的Buffer中是不是可以添加什么东西呢,尤其是脱盐过程，达到不沉淀的目的。 再次谢谢了，由于比较紧迫，请大家支支招吧。 |
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求助https://www.pnas.org/doi/10.1073/pnas.2535777123 全文
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2楼2014-04-08 13:44:27
yingshi0703
金虫 (小有名气)
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3楼2014-04-08 16:05:00
leezz4楼2014-04-08 16:24:32
5楼2014-04-08 20:33:52
【答案】应助回帖
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leezz(星海慧儿代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2014-04-18 09:49:35
leezz: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-04-23 13:16:27
leezz(星海慧儿代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2014-04-18 09:49:35
leezz: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-04-23 13:16:27
| 我们以前实验时可以再蛋白溶液里面加入0.1%的peg防治其高浓度凝聚，不知道对于你的蛋白是不是适用；而看你描述，你的蛋白好像不能离开NaCl环境，就算要上Q柱也并不需要完全除去NaCl啊，可以试下，在低浓度下（如0.05M NaCl或者0.1M NaCl）下会不会沉淀，如果可以，你可以脱盐，也可以直接稀释，一些浅见，希望能有帮助 |
6楼2014-04-17 20:17:59
7楼2014-04-17 22:49:31
本人越觉得这个蛋白未来前景不怎么地，目前来看太不稳定了，关键不是咱们投资做这东西，有人愿意出钱搞，也只好做下去了，谢谢了。 8楼2014-04-23 13:19:13
