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leezz

铜虫 (小有名气)

愤青

[求助] 蛋白质纯化 已有4人参与

大家好,有几个问题向大家请教。
    我的蛋白是短肽13KD,大肠表达,纯化流程是SP-HIC-Desalting-Q,由于这个蛋白不稳定,SP结果当蛋白含量高于6mg/ml时4度放置两天就会出现浑浊,HIC由于使用的NaCl(硫酸铵会导致蛋白沉淀),不会出现沉淀,而由于要过Q柱出去内毒素和核酸,所以要脱盐,当浓度高于1mg/ml在20mM PB中就会沉淀,很是头疼。
   PS:1. 请问大家在这个实验流程中怎么不让它沉淀,
         2. 上柱子的Buffer中是不是可以添加什么东西呢,尤其是脱盐过程,达到不沉淀的目的。
再次谢谢了,由于比较紧迫,请大家支支招吧。
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leezz

铜虫 (小有名气)

愤青

送红花一朵
引用回帖:
7楼: Originally posted by heylixing at 2014-04-17 22:49:31
这么不稳定,能做啥用。SP也能去内毒和核酸,干嘛还要Q。还有就是如果蛋白酸性稳定,可以在酸性过Q,直接流穿,让内毒和核酸吸附。

本人越觉得这个蛋白未来前景不怎么地,目前来看太不稳定了,关键不是咱们投资做这东西,有人愿意出钱搞,也只好做下去了,谢谢了。
8楼2014-04-23 13:19:13
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zengxr

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
leezz(星海慧儿代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2014-04-08 16:55:08
脱盐,你可以用纳滤膜试一试
2楼2014-04-08 13:44:27
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yingshi0703

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
leezz(星海慧儿代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2014-04-08 16:55:20
leezz: 金币+6, 有帮助 2014-04-10 16:40:47
我们做的是抗体脱盐,buffer中会加点EDTA。不知道和你的一样不~另外,我们做蛋白表达纯化,都保存在-80度,若浓度太大,在4度保存就容易沉降。
停留在那年夏天的风~
3楼2014-04-08 16:05:00
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leezz

铜虫 (小有名气)

愤青

送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by gfshksdl at 2014-04-08 16:24:32
抗体脱盐

一种短肽,脱盐就沉淀
5楼2014-04-08 20:33:52
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