应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

CyRhmU.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 新药研发 » 工艺研究 » 蛋白质纯化
51/1返回列表
查看: 1050  |  回复: 7
只看楼主@他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

leezz

铜虫 (小有名气)

愤青

[求助] 蛋白质纯化已有4人参与

大家好，有几个问题向大家请教。
    我的蛋白是短肽13KD,大肠表达，纯化流程是SP-HIC-Desalting-Q，由于这个蛋白不稳定，SP结果当蛋白含量高于6mg/ml时4度放置两天就会出现浑浊，HIC由于使用的NaCl（硫酸铵会导致蛋白沉淀），不会出现沉淀，而由于要过Q柱出去内毒素和核酸，所以要脱盐，当浓度高于1mg/ml在20mM PB中就会沉淀，很是头疼。
   PS:1. 请问大家在这个实验流程中怎么不让它沉淀，
         2. 上柱子的Buffer中是不是可以添加什么东西呢,尤其是脱盐过程，达到不沉淀的目的。
再次谢谢了，由于比较紧迫，请大家支支招吧。
回复此楼

» 猜你喜欢
1楼2014-04-06 12:49:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

heylixing

铁虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
leezz(星海慧儿代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2014-04-18 09:49:47
leezz: 金币+10, ★★★很有帮助 2014-04-23 13:15:43
这么不稳定，能做啥用。SP也能去内毒和核酸，干嘛还要Q。还有就是如果蛋白酸性稳定，可以在酸性过Q，直接流穿，让内毒和核酸吸附。
赞一下(1人) 回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

leezz
7楼2014-04-17 22:49:31
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

zengxr

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
leezz(星海慧儿代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2014-04-08 16:55:08
脱盐，你可以用纳滤膜试一试
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2014-04-08 13:44:27
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yingshi0703

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
leezz(星海慧儿代发): 金币+2, 多谢回帖交流 2014-04-08 16:55:20
leezz: 金币+6, ★有帮助 2014-04-10 16:40:47
我们做的是抗体脱盐，buffer中会加点EDTA。不知道和你的一样不~另外，我们做蛋白表达纯化，都保存在-80度，若浓度太大，在4度保存就容易沉降。
赞一下(1人) 回复此楼
停留在那年夏天的风~
3楼2014-04-08 16:05:00
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

leezz

铜虫 (小有名气)

愤青
送红花一朵
引用回帖:
4楼: Originally posted by gfshksdl at 2014-04-08 16:24:32
抗体脱盐

一种短肽，脱盐就沉淀
赞一下 回复此楼
5楼2014-04-08 20:33:52
 已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭