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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 综合其他 » 【求助/交流】关于在蛋白质纯化过程中防止蛋白质变性的方法
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炒饭大王

铜虫 (小有名气)

[交流] 【求助/交流】关于在蛋白质纯化过程中防止蛋白质变性的方法 已有2人参与

现在的情况是，酵母破碎后，室温20度下，1.2h活性损失50%，0度下，5h后活性损失40%，猜测可能是破碎液中有蛋白酶，或者是目的酶极易受温度影响，或者大家提供些可能的原因。因为实验室没有恒温柜，只能做个冷却夹套，或者加点蛋白酶抑制剂（不知哪种适用范围广些），或者各位提供些别的建议.
硫酸铵沉淀后，无法复溶，所以破碎后直接就到阴离子交换了，淋洗和洗脱基本都未收集到活力，操作是在室温下进行的，猜测可能的原因是在操作中蛋白就失活了

[ Last edited by 炒饭大王 on 2010-10-8 at 19:36 ]
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1楼 2010-10-08 11:24:55
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖交流
lstt09nk(金币+3):感谢交流~ 2010-10-08 14:47:16
不用别的什么建议了，马上接着下一步，无论下一步是硫酸铵沉淀还是什么方法沉淀，有可能做了之后蛋白酶就被分离掉了。如果还不行就还是马上做下一步，酶活力下降也可能是什么缓冲液或者什么东西对酶有害，反正就是尽快分离。

蛋白质抑制剂也别找，先用现有的，摸索一下添加量梯度，做一个系列实验。

不知道有没有蛋白酶就测一下蛋白酶活力，有就是有，没有也不代表没有，呵。
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流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
2楼2010-10-08 13:56:05
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炒饭大王

铜虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2010-10-08 13:56:05:
不用别的什么建议了，马上接着下一步，无论下一步是硫酸铵沉淀还是什么方法沉淀，有可能做了之后蛋白酶就被分离掉了。如果还不行就还是马上做下一步，酶活力下降也可能是什么缓冲液或者什么东西对酶有害，反正就是 ...

硫酸铵沉淀后，无法复溶，所以破碎后直接就到阴离子交换了，淋洗和洗脱基本都未收集到活力，操作是在室温下进行的，猜测可能的原因是在操作中蛋白就失活了
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3楼2010-10-08 19:35:34
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