| 查看: 2613 | 回复: 13 | |||
[交流]
野生菌产脂肪酶问题
|
|||
| 大家好，我想问一下一般野生菌产脂肪酶量大不？如黑曲霉，其酶活的测定可以用碱滴定法测出来吗？谢谢各位 |
回复此楼» 猜你喜欢
2026年8月25日国自然放榜前突然收到列入评审专家邮件，有关系吗？
已经有19人回复
-
售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急
已经有3人回复
-
今天务委会开完了，明天出结果吗
已经有21人回复
-
在坚冰还盖着北海的时候，我看到了怒放的梅花。
已经有9人回复
-
明天应该可查了！？
已经有6人回复
-
有没有大神帮我看看基金代码
已经有10人回复
-
放榜前的不淡定
已经有19人回复
-
某些机构，以效率低为荣，以效率低作为存在感
已经有10人回复
-
2026国自然函评费到账
已经有23人回复
-
今日不放榜？网传国自然预计 8 月 27 日可查结果
已经有22人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于308、309不锈钢焊材延伸率问题。
已经有5人回复
- WB三明治--滤纸大小问题
已经有18人回复
- 循环伏安法测钴配合物的问题
已经有8人回复
- 请教关于柳树水培的问题
已经有12人回复
- 反应后处理问题探讨
已经有26人回复
- 请教一个简单问题
已经有15人回复
- 非线性最小二乘拟合（初值问题）lsqcurvefit 函数的设定
已经有14人回复
- 硫酸铵沉淀脂肪酶的问题
已经有5人回复
- p-NPP法测定脂肪酶活性p-NP标准曲线问题
已经有9人回复
- 霉菌中形成的脂肪酶是胞内酶 还是胞外酶？
已经有5人回复
- 质粒转化到大肠杆菌野生菌中验证遇到的非常非常怪的问题
已经有3人回复
- 关于PS-Amano脂肪酶的问题
已经有5人回复
- 【求助/交流】脂肪酶活性检测
已经有17人回复
|
2.1.3.7 脂肪酶活力测定 (1) 酸碱滴定法[3] 5mL 反应体系包括4.4mL 50mM pH8.0磷酸盐缓冲液，500μL 乳化底物和100μL 待测酶液。根据待测酶液活力的大小可以适当增减待测酶液的体积，增减的体积利用增减缓冲液相同的体积来调整。利用蒸馏水代替待测酶液测定空白对照。反应体系置于恒温摇床中，设定某一测活温度，摇床转数为150-180rpm，反应5min. 根据待测酶液活力的大小可以适当调整反应时间。反应结束后迅速向反应体系中倒入1:1（v/v）的乙醇/丙酮混合液终止反应，以酚酞为指示剂，用新鲜的20mM NaOH溶液精确进行滴定，记录下每次所用的NaOH的体积并计算酶活力，公式如下： (1) VNaOH酶：含酶反应体系中滴定消耗的NaOH 的体积（mL）；VNaOH空白：空白对照中滴定消耗的NaOH 的体积（mL）；CNaOH：NaOH 的浓度（mM）；t：反应时间（min）；V酶：待测酶液的体积（mL）；C酶：待测酶液酶的浓度（mg/mL）。能够在1 分钟内水解底物生成1μmol 脂肪酸的酶量即定义为1 个酶活力单位（U）。 底物乳化液的配制：首先配制4%（w/v）的聚乙烯醇溶液，而后取1mL甘油三酯或橄榄油底物与4mL上述聚乙烯醇溶液充分混合，冰浴条件下超声直至溶液变成均一的乳白色溶液。乳化液于4℃保存，使用前需要重新超声乳化。 (2) 光吸收法 测活体系包括930μL 50mM pH8.0的磷酸缓冲液，20μL 10mM pNP-C8底物溶液，50μL 待测酶液。根据待测酶液活力的大小可以适当增减待测酶液的体积，增减的体积利用增减缓冲液相同的体积来调整。利用蒸馏水代替待测酶液测定空白对照。在待测温度下用UV2550 紫外可见分光光度计测定测活体系于405nm 处的吸收值。能够在1 分钟内水解底物生成1μmol 对硝基苯酚的酶量即定义为1 个酶活力单位（U）。 酶活计算公式如下： (2) 其中△OD405：相同时间内于405nm 处，含待测酶液的测活体系的吸收变化值与空白对照组的差值； V：测活体积（本方法中为1mL）；ε为摩尔消光系数，ε =0.016μM-1；t：测活时间（min）；V酶：测活体系中加入的待测酶液的体积（mL，本方法中为0.05mL）；C酶：待测酶液的蛋白浓度(mg/mL).  公式一  公式二 |
12楼2012-06-20 20:53:00
2楼2012-06-13 10:49:31
3楼2012-06-13 13:52:26
4楼2012-06-13 16:58:09
5楼2012-06-14 11:01:22
6楼2012-06-18 16:10:13
7楼2012-06-19 09:05:17
8楼2012-06-19 16:20:28
9楼2012-06-20 14:39:09
10楼2012-06-20 14:58:50
11楼2012-06-20 17:30:39
13楼2012-06-24 09:10:26
14楼2012-06-24 12:16:55
28