| 查看: 1575 | 回复: 4 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
Pushing2012金虫 (正式写手)
|
[求助]
原核表达蛋白变小
|
|
| 本人用原核Rosetta，载体PET30做蛋白原核表达，目的基因992bp，预测蛋白大小41kda，每次诱导表达SDS检测，都出现蛋白变小，与对照相比，在27kda左右出现一个非常明显的带，以及在37kda左右出现一个不是特别明显的带，但仔细看还是能看到，在41kda左右没有新条带产生，求解。 另外，第一次做表达用的是BL21，当时只出现37kda的带，镍柱纯化后 纯化得到的蛋白SDS检测又在41kDa,真让人费解，有高人能帮忙解决和解释下这个问题吗 |
回复此楼» 猜你喜欢
不合理蛙科研实验中的趣事：实验器材的 “乌龙”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验中的趣事：和实验材料的 “斗智斗勇”
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有203人回复
-
蛋白质检测：精准分析，解锁生物分子的密码
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之小鼠实验：严谨设计，解析生命机制的重要载体
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之重金属检测：精准筛查，守护健康与环境的防线
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“蛙测重金属我背锅三千”
已经有0人回复
-
不合理蛙科研实验之“鼠逃三次我发三篇SCI”
已经有0人回复
-
纳米粒度分析
已经有3人回复
-
林科院林化所招收材料与化工专业硕士，坐标南京
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 蛋白激酶原核表达
已经有14人回复
- 原核表达，蛋白活性问题
已经有12人回复
- 毕赤酵母表达问题求教
已经有19人回复
- 【资料】studier的自动诱导系统---原核诱导表达蛋白，无需IPTG
已经有125人回复
- pET-28a原核不能表达目的蛋白
已经有17人回复
- 原核表达 PET-30载体 目的蛋白分子量偏小？
已经有18人回复
- 关于用Ni-NTA His.bind树脂纯化原核表达蛋白
已经有16人回复
- 原核表达纯化蛋白
已经有8人回复
- 原核表达蛋白诱导不出来
已经有16人回复
- 原核表达系统不表达目的蛋白
已经有8人回复
- 原核同时表达两个蛋白，需要自行给其中一个加标签，请教了！！！
已经有4人回复
- 【求助/交流】离子交换纯化原核表达蛋白
已经有15人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白分子量偏大
已经有17人回复
- 原核表达蛋白降解 有效期到2010.8.5
已经有10人回复
- 【求助/交流】原核表达 蛋白没有表达求助！
已经有20人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
已经有29人回复
Pushing2012
金虫 (正式写手)
- 应助: 13 (小学生)
- 金币: 1679.8
- 散金: 10
- 红花: 1
- 帖子: 855
- 在线: 121.8小时
- 虫号: 1672843
- 注册: 2012-03-07
- 性别: GG
- 专业: 生物化学
4楼2012-05-30 16:32:14
2楼2012-05-30 11:00:39
roomofxw
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 5
- 应助: 13 (小学生)
- 贵宾: 0.005
- 金币: 2882.1
- 散金: 69
- 红花: 7
- 帖子: 755
- 在线: 1020小时
- 虫号: 812203
- 注册: 2009-07-20
- 专业: 生物化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-05-30 13:44:24
Pushing2012: 金币+20, ★★★很有帮助 2012-06-01 10:50:56
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+3, 鼓励应助 2012-05-30 13:44:24
Pushing2012: 金币+20, ★★★很有帮助 2012-06-01 10:50:56
|
1.酶活啊，binding啥的如果满足需求了，一般就不折腾了。文献中是不是有类似情况描述。 2.产量是否能够对应上，纯化后的41kDa是否就是原先37kDa的条带，还是看不到的条带的富集。 3.换了菌株，表达条件，破菌条件不同有可能会造成表达中止或断裂，降解，可以设计N，C的his tag用来检测。再换其他的，或者换回去。 4.同一个蛋白，由于结构的不同，在SDS上面是有可能跑出不同大小的。也不排除纯化条件产生复性效果，造成结构恢复正常。虽无明显变复性过程，但是毕竟盐浓度，pH甚至暴漏在空气中时间不同，也不绝对说没用可能吧。 5.既然已经纯化出来了，那做N,C端测序最有保证了  |
3楼2012-05-30 11:45:57
5楼2012-05-30 22:36:28
