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Pushing2012金虫 (正式写手)
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[求助]
原核表达蛋白变小
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| 本人用原核Rosetta，载体PET30做蛋白原核表达，目的基因992bp，预测蛋白大小41kda，每次诱导表达SDS检测，都出现蛋白变小，与对照相比，在27kda左右出现一个非常明显的带，以及在37kda左右出现一个不是特别明显的带，但仔细看还是能看到，在41kda左右没有新条带产生，求解。 另外，第一次做表达用的是BL21，当时只出现37kda的带，镍柱纯化后 纯化得到的蛋白SDS检测又在41kDa,真让人费解，有高人能帮忙解决和解释下这个问题吗 |
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5楼2012-05-30 22:36:28
2楼2012-05-30 11:00:39
roomofxw
木虫 (正式写手)
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【答案】应助回帖
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Pushing2012: 金币+20, ★★★很有帮助 2012-06-01 10:50:56
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1.酶活啊，binding啥的如果满足需求了，一般就不折腾了。文献中是不是有类似情况描述。 2.产量是否能够对应上，纯化后的41kDa是否就是原先37kDa的条带，还是看不到的条带的富集。 3.换了菌株，表达条件，破菌条件不同有可能会造成表达中止或断裂，降解，可以设计N，C的his tag用来检测。再换其他的，或者换回去。 4.同一个蛋白，由于结构的不同，在SDS上面是有可能跑出不同大小的。也不排除纯化条件产生复性效果，造成结构恢复正常。虽无明显变复性过程，但是毕竟盐浓度，pH甚至暴漏在空气中时间不同，也不绝对说没用可能吧。 5.既然已经纯化出来了，那做N,C端测序最有保证了  |
3楼2012-05-30 11:45:57
Pushing2012
金虫 (正式写手)
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4楼2012-05-30 16:32:14
5