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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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hufei1010785

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 原核表达纯化蛋白

最近利用原核表达技术,纯化获得了一个GST蛋白,SDS-PAGE显示位置正确,但是用酶标仪没有检测到活性啊,求助这是怎么回事啊!谢谢!
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
西瓜(金币+3, 专家考核): Good! 2012-01-04 12:19:52
带GST纯化标签的蛋白是融合蛋白,检测不到活性也正常呀。蛋白融合后GST和目的蛋白的空间结构都可能发生改变,酶有没有活性跟形成的空间结构关系密切。可以纯化出来的蛋白酶切去除GST标签后再试试检测活性。
2楼2012-01-03 21:56:22
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hzlatqh

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖


感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+1): 鼓励应助 2012-01-04 08:46:35
融合蛋白就是有一定的风险失去原有的活性,这一点很多例子。
两个黄鹂鸣翠柳,一行白鹭上青天
3楼2012-01-03 23:57:27
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月月大可

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 很有帮助哦 2012-01-04 08:47:11
就算去除标签也一样可能没有活性。不是说你的蛋白可溶表达了它就正确折叠了,不正确折叠当然没有活性。
建议:先用酶在柱上讲标签切除后尝试活性检测,而后如果还是没有活性就可以需要考虑更换表达体系了
4楼2012-01-04 02:56:52
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hufei1010785

铁杆木虫 (小有名气)

好的,谢谢大家!
5楼2012-01-04 09:21:15
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脱水拂空

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
wanhscn(金币+2): 有这个可能性! 2012-01-04 20:30:26
你的如果是包涵体那自然没有活性啦 你先把GST切除在做活性看看怎么样
6楼2012-01-04 18:53:16
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shine372

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
先用酶切除标签后尝试活性检测,而后如果还是没有活性就需要考虑更换表达体系
7楼2012-01-05 13:59:55
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郜珊

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以用CDNB法测GST的活性
8楼2013-01-28 17:29:15
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hubinghello

金虫 (小有名气)

引用回帖:
8楼: Originally posted by 郜珊 at 2013-01-28 17:29:15
可以用CDNB法测GST的活性

有没有有关CDNB法测GST活性的方法资料?
去爱吧,像不曾爱过一样;跳舞吧,像没有人观看一样;唱歌吧,像没有人聆听一样;生活吧,像每天都是世界末日一样;赚钱吧,像不是为了钱一样。
9楼2013-06-16 21:27:12
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