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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 原核表达纯化蛋白
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hufei1010785

铁杆木虫 (小有名气)

[求助] 原核表达纯化蛋白

最近利用原核表达技术，纯化获得了一个GST蛋白，SDS-PAGE显示位置正确，但是用酶标仪没有检测到活性啊，求助这是怎么回事啊！谢谢！
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1楼 2012-01-03 17:12:04
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lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜(金币+3, 专家考核): Good！ 2012-01-04 12:19:52
带GST纯化标签的蛋白是融合蛋白，检测不到活性也正常呀。蛋白融合后GST和目的蛋白的空间结构都可能发生改变，酶有没有活性跟形成的空间结构关系密切。可以纯化出来的蛋白酶切去除GST标签后再试试检测活性。
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2楼2012-01-03 21:56:22
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hzlatqh

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+1): 鼓励应助 2012-01-04 08:46:35
融合蛋白就是有一定的风险失去原有的活性，这一点很多例子。
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两个黄鹂鸣翠柳，一行白鹭上青天
3楼2012-01-03 23:57:27
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月月大可

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+2): 很有帮助哦 2012-01-04 08:47:11
就算去除标签也一样可能没有活性。不是说你的蛋白可溶表达了它就正确折叠了，不正确折叠当然没有活性。
建议：先用酶在柱上讲标签切除后尝试活性检测，而后如果还是没有活性就可以需要考虑更换表达体系了
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4楼2012-01-04 02:56:52
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hufei1010785

铁杆木虫 (小有名气)
好的，谢谢大家！
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5楼2012-01-04 09:21:15
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脱水拂空

铜虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
wanhscn(金币+2): 有这个可能性！ 2012-01-04 20:30:26
你的如果是包涵体那自然没有活性啦 你先把GST切除在做活性看看怎么样
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6楼2012-01-04 18:53:16
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shine372

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
先用酶切除标签后尝试活性检测，而后如果还是没有活性就需要考虑更换表达体系
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7楼2012-01-05 13:59:55
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郜珊

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

可以用CDNB法测GST的活性
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8楼2013-01-28 17:29:15
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hubinghello

金虫 (小有名气)
引用回帖:
8楼: Originally posted by 郜珊 at 2013-01-28 17:29:15
可以用CDNB法测GST的活性

有没有有关CDNB法测GST活性的方法资料？
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去爱吧，像不曾爱过一样；跳舞吧，像没有人观看一样；唱歌吧，像没有人聆听一样；生活吧，像每天都是世界末日一样；赚钱吧，像不是为了钱一样。
9楼2013-06-16 21:27:12
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