| 查看: 2463 | 回复: 7 | |||
| 本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看 | |||
[求助]
95KD蛋白纯化求助！！！！！！！！
|
|||
本人做了一个95KD的聚合酶蛋白，表达量蛮小，纯化过程中遇到了困难。分别用了20mM、50mM和250mM的咪唑溶液进行洗脱，发现在20和50mM低浓度洗脱时候，杂蛋白洗下来很少，250mM咪唑却把大量目的蛋白和杂蛋白一起洗脱下来了，给纯化造成了极大的困难。小弟想请教下各位大侠有什么高招给解决下。  SDS图谱 |
回复此楼» 收录本帖的淘帖专辑推荐
 生物相关 |
» 猜你喜欢
求调剂
已经有6人回复
-
275求调剂
已经有4人回复
-
318求调剂
已经有6人回复
-
305分求调剂（食品工程）
已经有5人回复
-
求调剂院校信息
已经有5人回复
-
一志愿070300浙大化学358分，求调剂！
已经有3人回复
-
一志愿东华大学化学070300，求调剂
已经有5人回复
-
求调剂
已经有5人回复
-
一志愿北京化工大学070300 学硕336求调剂
已经有6人回复
-
考研调剂
已经有3人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 求助蛋白纯化的高手
已经有5人回复
- GST融合蛋白纯化求助 ！！！
已经有19人回复
- 【求助/交流】蛋白质纯化的疑难问题
已经有11人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化中透析的问题！！
已经有9人回复
- 【求助/交流】求助 小分子量蛋白多肽纯化
已经有12人回复
- 【求助/交流】关于蛋白纯化
已经有30人回复
- 【求助/交流】如何高度纯化蛋白，急急急
已经有15人回复
- 【求助/交流】求助免疫球蛋白纯化后有沉淀的事情！
已经有3人回复
- 【求助/交流】蛋白纯化
已经有3人回复
- 【求助/交流】原核表达蛋白纯化
已经有29人回复
lihuan0525
金虫 (职业作家)
- BioEPI: 1
- 应助: 565 (博士)
- 金币: 2145
- 散金: 687
- 红花: 15
- 帖子: 3299
- 在线: 551.8小时
- 虫号: 1292024
- 注册: 2011-05-11
- 性别: GG
- 专业: 蛋白质组学
2楼2012-05-22 17:50:07
dshlove
木虫 (正式写手)
- BioEPI: 9
- 应助: 237 (大学生)
- 金币: 4764.7
- 散金: 20
- 红花: 10
- 帖子: 852
- 在线: 419.2小时
- 虫号: 1609389
- 注册: 2012-02-10
- 性别: GG
- 专业: 污染控制化学
【答案】应助回帖
★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+6, BioEPI+1, 应助指数+1, 有道理 2012-05-22 18:00:54
若鱼@@: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-23 09:09:52
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+6, BioEPI+1, 应助指数+1, 有道理 2012-05-22 18:00:54
若鱼@@: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-23 09:09:52
|
建议你先用Imidazole拉个线性试试，最佳浓度能洗下杂蛋白。再用阶梯去洗。不过这只是摸条件用，这样目的蛋白损失会很大。最好的是阶梯洗脱。 对于你这张蛋白胶，不知道你洗杂的量。 我看50mM时候你的目的蛋白就已经开始下来了，而后面你直接跳到250mM去elute了，我个人觉得很不妥。 我给你个方案试试：先在50mM之前用低浓度Imidazole，比如30mM或者40mM大量洗洗，5ml柱子建议至少洗200ml。因为你胶上看20mM已经很好的除杂了。其次，50mM到250mM之间多设几个阶梯试试，75mM，100mM，150mM，200mM都要试试，见峰收就行。这样保证会有一个浓度下目的蛋白会很多。通过这些步骤最后的250mM洗下的就可要可不要了。 这样选择纯一点去过Q或者S，或者HP就能进一步纯化了。 希望能帮到你。可以互相交流。 |
3楼2012-05-22 17:51:58
silicare
荣誉版主 (文坛精英)
合伙创业版兼职版主
- BioEPI: 14
- 应助: 88 (初中生)
- 贵宾: 29.823
- 金币: 18946.3
- 散金: 24272
- 红花: 300
- 沙发: 88
- 帖子: 10222
- 在线: 1602.6小时
- 虫号: 948825
- 注册: 2010-01-26
- 专业: 摩尼教
- 管辖: 新药研发
4楼2012-05-22 18:02:23
5楼2012-05-22 20:59:28
6楼2012-05-23 09:16:02
7楼2012-05-25 15:36:22
冼亮淀粉酶
专家顾问 (知名作家)
生物大分子降解酶
-
专家经验: +248 - BioEPI: 73
- 应助: 257 (大学生)
- 贵宾: 0.272
- 金币: 19459.9
- 散金: 1704
- 红花: 121
- 帖子: 6586
- 在线: 2777.7小时
- 虫号: 856414
- 注册: 2009-09-25
- 性别: GG
- 专业: 环境微生物学
- 管辖: 微生物
8楼2012-05-26 00:43:45
