应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 95KD蛋白纯化求助！！！！！！！！
51/1返回列表
查看: 2445  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

若鱼@@

新虫 (初入文坛)

[求助] 95KD蛋白纯化求助！！！！！！！！

本人做了一个95KD的聚合酶蛋白，表达量蛮小，纯化过程中遇到了困难。分别用了20mM、50mM和250mM的咪唑溶液进行洗脱，发现在20和50mM低浓度洗脱时候，杂蛋白洗下来很少，250mM咪唑却把大量目的蛋白和杂蛋白一起洗脱下来了，给纯化造成了极大的困难。小弟想请教下各位大侠有什么高招给解决下。

SDS图谱
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生物相关

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-22 16:54:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jasco

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
1.如果是最大的那条带是目的蛋白的话，表达量不算低了，毕竟分子量较大
2.3楼推荐的方法很具体也很实用，同样推荐30-40mM咪唑洗杂，从50mM咪唑就有目的蛋白洗脱来看，拉个75mM，100mM应该差不多了
3.是包涵体的话，还可以看看用什么浓度的尿素或盐酸胍去溶最好，这样起始的杂蛋白就少些
赞一下(2人) 回复此楼
5楼2012-05-22 20:59:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
尝试其他浓度或者改变PH值，实验只能耐着性子试啊
赞一下 回复此楼
2楼2012-05-22 17:50:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+6, BioEPI+1, 应助指数+1, 有道理 2012-05-22 18:00:54
若鱼@@: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-23 09:09:52
建议你先用Imidazole拉个线性试试，最佳浓度能洗下杂蛋白。再用阶梯去洗。不过这只是摸条件用，这样目的蛋白损失会很大。最好的是阶梯洗脱。
对于你这张蛋白胶，不知道你洗杂的量。
我看50mM时候你的目的蛋白就已经开始下来了，而后面你直接跳到250mM去elute了，我个人觉得很不妥。
我给你个方案试试：先在50mM之前用低浓度Imidazole，比如30mM或者40mM大量洗洗，5ml柱子建议至少洗200ml。因为你胶上看20mM已经很好的除杂了。其次，50mM到250mM之间多设几个阶梯试试，75mM，100mM，150mM，200mM都要试试，见峰收就行。这样保证会有一个浓度下目的蛋白会很多。通过这些步骤最后的250mM洗下的就可要可不要了。
这样选择纯一点去过Q或者S，或者HP就能进一步纯化了。
希望能帮到你。可以互相交流。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-05-22 17:51:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
还有就是你的电泳没有marker，哪个才是你的目的条带。
最上边的条带很粗，后边都有洗脱掉，你到底洗脱了多大的体积？
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-05-22 18:02:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 284求调剂 +8 天下熯 2026-02-28 8/400 2026-03-02 00:15 by 暮雨星晴
[考研] 材料学硕318求调剂 +11 February_Feb 2026-03-01 13/650 2026-03-01 23:53 by ccp273206157
[考研] 一志愿郑大材料学硕298分，求调剂 +5 wsl111 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:45 by 暮雨星晴
[考研] 材料学硕318求调剂 +5 February_Feb 2026-03-01 5/250 2026-03-01 23:31 by L135790
[考研] 292求调剂 +6 yhk_819 2026-02-28 6/300 2026-03-01 23:23 by 向上的胖东
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +3 Qwertyuop 2026-03-01 3/150 2026-03-01 23:18 by aaadim
[考研] 275求调剂 +3 明远求学 2026-03-01 3/150 2026-03-01 22:29 by 刘兵
[考研] 306分材料调剂 +4 chuanzhu川烛 2026-03-01 5/250 2026-03-01 19:48 by 无际的草原
[考研] 298求调剂 +6 axyz3 2026-02-28 6/300 2026-03-01 19:00 by 18137688336
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 化工专硕348，一志愿985求调剂 +5 弗格个 2026-02-28 8/400 2026-03-01 17:25 by sunny81
[考研] 281求调剂 +4 2026计算机_诚心 2026-03-01 7/350 2026-03-01 17:20 by 2026计算机_诚心
[考研] 285求调剂 +8 满头大汗的学生 2026-02-28 8/400 2026-03-01 16:47 by caszguilin
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 课题组接收材料类调剂研究生 +3 gaoxiaoniuma 2026-02-28 4/200 2026-03-01 14:30 by jjj三跨
[考研] 295复试调剂 +3 简木ChuFront 2026-03-01 3/150 2026-03-01 14:27 by zzxw520th
[考研] 调剂 +3 简木ChuFront 2026-02-28 3/150 2026-03-01 11:46 by 王伟要上岸啊
[考博] 博士自荐 +4 kkluvs 2026-02-28 4/200 2026-03-01 10:19 by 馥安馥安
[考研] 264求调剂 +3 巴拉巴拉根556 2026-02-28 3/150 2026-02-28 21:31 by gaoxiaoniuma
[硕博家园] 【博士招生】太原理工大学2026化工博士 +4 N1ce_try 2026-02-24 8/400 2026-02-26 08:40 by N1ce_try
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭