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若鱼@@

新虫 (初入文坛)

[求助] 95KD蛋白纯化求助!!!!!!!!

本人做了一个95KD的聚合酶蛋白,表达量蛮小,纯化过程中遇到了困难。分别用了20mM、50mM和250mM的咪唑溶液进行洗脱,发现在20和50mM低浓度洗脱时候,杂蛋白洗下来很少,250mM咪唑却把大量目的蛋白和杂蛋白一起洗脱下来了,给纯化造成了极大的困难。小弟想请教下各位大侠有什么高招给解决下。

SDS图谱
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radium4046

铁虫 (初入文坛)

lysis buffer直接加20mM imidazole,有效避免更多杂蛋白结合Ni柱
在50~250mM之间多设几个梯度
要不直接用AKTA拉个线性好了 最直接
7楼2012-05-25 15:36:22
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