应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

Znn3bq.jpeg
小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 95KD蛋白纯化求助！！！！！！！！
汕头大学海洋科学接受调剂
51/1返回列表
查看: 2551  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

若鱼@@

新虫 (初入文坛)

[求助] 95KD蛋白纯化求助！！！！！！！！

本人做了一个95KD的聚合酶蛋白，表达量蛮小，纯化过程中遇到了困难。分别用了20mM、50mM和250mM的咪唑溶液进行洗脱，发现在20和50mM低浓度洗脱时候，杂蛋白洗下来很少，250mM咪唑却把大量目的蛋白和杂蛋白一起洗脱下来了，给纯化造成了极大的困难。小弟想请教下各位大侠有什么高招给解决下。

SDS图谱
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

生物相关

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-05-22 16:54:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

若鱼@@

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
3楼: Originally posted by dshlove at 2012-05-22 17:51:58:
建议你先用Imidazole拉个线性试试，最佳浓度能洗下杂蛋白。再用阶梯去洗。不过这只是摸条件用，这样目的蛋白损失会很大。最好的是阶梯洗脱。
对于你这张蛋白胶，不知道你洗杂的量。
我看50mM时候你的目的蛋白就已

银虫兄说的很有道理，我回头尝试一下。
赞一下 回复此楼
6楼2012-05-23 09:16:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

lihuan0525

金虫 (职业作家)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
尝试其他浓度或者改变PH值，实验只能耐着性子试啊
赞一下 回复此楼
2楼2012-05-22 17:50:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dshlove

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
silicare: 金币+6, BioEPI+1, 应助指数+1, 有道理 2012-05-22 18:00:54
若鱼@@: 金币+1, ★★★很有帮助 2012-05-23 09:09:52
建议你先用Imidazole拉个线性试试，最佳浓度能洗下杂蛋白。再用阶梯去洗。不过这只是摸条件用，这样目的蛋白损失会很大。最好的是阶梯洗脱。
对于你这张蛋白胶，不知道你洗杂的量。
我看50mM时候你的目的蛋白就已经开始下来了，而后面你直接跳到250mM去elute了，我个人觉得很不妥。
我给你个方案试试：先在50mM之前用低浓度Imidazole，比如30mM或者40mM大量洗洗，5ml柱子建议至少洗200ml。因为你胶上看20mM已经很好的除杂了。其次，50mM到250mM之间多设几个阶梯试试，75mM，100mM，150mM，200mM都要试试，见峰收就行。这样保证会有一个浓度下目的蛋白会很多。通过这些步骤最后的250mM洗下的就可要可不要了。
这样选择纯一点去过Q或者S，或者HP就能进一步纯化了。
希望能帮到你。可以互相交流。
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2012-05-22 17:51:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

silicare

荣誉版主 (文坛精英)

合伙创业版兼职版主

优秀版主

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
还有就是你的电泳没有marker，哪个才是你的目的条带。
最上边的条带很粗，后边都有洗脱掉，你到底洗脱了多大的体积？
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-05-22 18:02:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 材料工程281还有调剂机会吗 +40 xaw. 2026-04-11 41/2050 2026-04-14 19:21 by Art1977
[考研] 通信工程求调剂！！！ +4 zlb770521 2026-04-14 4/200 2026-04-14 18:19 by lbsjt
[考研] 297，工科调剂? +6 河南农业大学-能 2026-04-14 6/300 2026-04-14 16:04 by Art1977
[考研] 300分求调剂 （085501机械专硕，本科扬大） +9 xu@841019 2026-04-11 10/500 2026-04-14 08:48 by 木木mumu～
[考研] 求调剂，985材料与化工348分 +9 涵竹刘 2026-04-11 14/700 2026-04-13 22:26 by 涵竹刘
[基金申请] 2026 WR青拔 +3 冬日阳光CAS 2026-04-09 6/300 2026-04-13 18:40 by liuchb715
[考研] 290求调剂 +18 柯淮然 2026-04-12 20/1000 2026-04-13 12:56 by cyh—315
[考研] 368化学求调剂 +14 wwwwabcde 2026-04-07 15/750 2026-04-13 08:36 by lhj2009
[考研] 一志愿华中农微生物，288分，三年实验经历 +11 代fish 2026-04-09 11/550 2026-04-12 10:21 by Hayaay
[考研] 303求调剂 +14 SereinQ 2026-04-10 15/750 2026-04-11 20:43 by 蓝云思雨
[考研] 070300化学279求调剂 +19 哈哈哈^_^ 2026-04-08 20/1000 2026-04-11 20:43 by stoner78
[考研] 284求调剂 +11 archer.. 2026-04-09 12/600 2026-04-11 20:23 by 蓝云思雨
[考研] 求调剂 +6 电气300求调剂不 2026-04-08 6/300 2026-04-11 20:14 by 逆水乘风
[考研] 085400 328分 求调剂 +10 喂你一个大橙子 2026-04-09 14/700 2026-04-11 19:53 by lqspecial
[考研] 调剂 +5 文道星台 2026-04-11 5/250 2026-04-11 15:01 by 凯凯要变帅
[考研] 22408 352分求调剂0854类 +4 努力的夏末 2026-04-09 4/200 2026-04-11 09:57 by zhq0425
[考研] 293调剂 +25 yj1221 2026-04-08 26/1300 2026-04-10 15:02 by 柴小白
[考研] 初试分332，一志愿报考西北工业大学， +11 故人?? 2026-04-09 11/550 2026-04-09 21:54 by JineShine
[考研] 286求调剂 +19 Faune 2026-04-08 20/1000 2026-04-09 08:36 by 哦哦123
[考研] 287求调剂 +6 Fnhc 2026-04-07 6/300 2026-04-08 10:05 by xingguangj
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭