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就要被蛋白质电泳（SDS-PAGE）灭了，有图有真相，望高手指点 已有21人参与
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我的分离胶浓度为12，实验室其他人和我同时跑都能跑出清晰的条带。 marker和样品的量均为10微升。 左边两个是我的样，右边依次是marker、同学的样。我几经跑很多次了，每次都这样，这不是偶然，而是必然啊 我用细菌胞外产物跑PAGE，要不是没有条带，要不就是模糊的条带，maker和样品的泳道挨着就会被及变形，样品的泳道很宽，差不多是两个用到那么宽。用考马斯亮蓝测定蛋白质含量为1.78mg/ml。在电泳时会看到有黄色物质从样品泳道中析出。请各位高手指点迷津，小女子不胜感激啊！！！！   |
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhaohq1209: 金币+4, 鼓励交流哈~高手初现 2012-05-18 08:42:44
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zhaohq1209: 金币+4, 鼓励交流哈~高手初现 2012-05-18 08:42:44
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黄色物质有可能是PH值不对啊，一般情况下用TCA即三氯乙酸浓缩后的蛋白，如果不用丙酮洗涤除去TCA残留，在加2倍或5倍SDS上样缓冲液前，不加一定量的NaOH中和TCA的话，用SDS样品处理液处理后的蛋白样品在上样前是黄色的。还有如果自己配置的SDS上样缓冲液，如果PH值偏低也是显示有点黄色。但是以我们的经验来看，样品PH值稍微偏低基本不影响跑样。另外TCA法浓缩蛋白跑PAGE还是很漂亮的。 还有，我们实验室曾经有表达的很多上清蛋白在经PBS透析后经PEG8000浓缩，测定蛋白样品也挺大，但是跑蛋白胶就是像楼主似的模糊一片。怀疑是PEG8000的问题影响跑样。后改为TCA浓缩后大部分解决了这一问题。但是有的蛋白用硫酸铵浓缩后跑样还是有时候呈现模糊一片。仅限于个别蛋白，猜测可能与蛋白表达量低等有关。 |
6楼2012-05-17 22:41:25
14楼2012-05-18 22:34:11