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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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tomorrowhl

新虫 (初入文坛)

[交流] 就要被蛋白质电泳(SDS-PAGE)灭了,有图有真相,望高手指点 已有21人参与

我的分离胶浓度为12,实验室其他人和我同时跑都能跑出清晰的条带。
marker和样品的量均为10微升。
左边两个是我的样,右边依次是marker、同学的样。我几经跑很多次了,每次都这样,这不是偶然,而是必然啊

我用细菌胞外产物跑PAGE,要不是没有条带,要不就是模糊的条带,maker和样品的泳道挨着就会被及变形,样品的泳道很宽,差不多是两个用到那么宽。用考马斯亮蓝测定蛋白质含量为1.78mg/ml。在电泳时会看到有黄色物质从样品泳道中析出。请各位高手指点迷津,小女子不胜感激啊!!!!

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vetzhang

金虫 (小有名气)


小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
试试其他的浓缩方法吧。比如离心株膜法等。
透析的话试试用不含Na盐的含一定浓度甘油的Tris缓冲液试试,把PH值调整到6.5-8.5之间,再浓缩后试试。但总感觉PEG8000或20000对浓缩后的蛋白跑电泳有影响。

另外,TCA能够使蛋白变性,但是如果跑不连续电泳的话,用SDS上样缓冲液处理后的蛋白样品同样会变性的。所以用TCA法浓缩蛋白跑蛋白电泳是可行的。
14楼2012-05-18 22:34:11
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chengjg

木虫 (正式写手)

★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhaohq1209: 金币+1, 有这种可能~ 2012-05-18 08:41:49
电泳槽是不是接触不好了 铂丝有问题 还是密封不好呀
2楼2012-05-17 19:44:30
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qjy_134

铜虫 (小有名气)


★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhaohq1209: 金币+1, 跟样品的浓度关系应该不太大吧,关键是上样量吧 2012-05-18 08:42:16
样品缓冲液不对,还有样品浓度低
3楼2012-05-17 19:53:51
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colorfulmiao

木虫 (小有名气)

★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
amisking: 金币+4, 鼓励发帖交流问题。 2012-05-17 20:22:19
黄色的物质?是你的样品中溶剂含有影响电泳结果的物质吧?有没有试过先透析再跑电泳呢?你的蛋白浓度比较大 透析应该不会影响蛋白显色,把样品透析好再跑电泳应该就好了
还有 跑电泳前先把样品离心一下 祝成功
亦余心之所善兮虽九死其犹未悔
4楼2012-05-17 20:15:57
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