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tomorrowhl

新虫 (初入文坛)

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[交流] 就要被蛋白质电泳（SDS-PAGE）灭了，有图有真相，望高手指点已有21人参与

我的分离胶浓度为12，实验室其他人和我同时跑都能跑出清晰的条带。
marker和样品的量均为10微升。
左边两个是我的样，右边依次是marker、同学的样。我几经跑很多次了，每次都这样，这不是偶然，而是必然啊

我用细菌胞外产物跑PAGE，要不是没有条带，要不就是模糊的条带，maker和样品的泳道挨着就会被及变形，样品的泳道很宽，差不多是两个用到那么宽。用考马斯亮蓝测定蛋白质含量为1.78mg/ml。在电泳时会看到有黄色物质从样品泳道中析出。请各位高手指点迷津，小女子不胜感激啊！！！！

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1楼 2012-05-17 18:55:43

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tomorrowhl

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4楼: Originally posted by colorfulmiao at 2012-05-17 20:15:57:
黄色的物质？是你的样品中溶剂含有影响电泳结果的物质吧？有没有试过先透析再跑电泳呢？你的蛋白浓度比较大透析应该不会影响蛋白显色，把样品透析好再跑电泳应该就好了
还有跑电泳前先把样品离心一下祝成功

谢谢你的回答。
我是先盐析了蛋白，在重悬，最后透析浓缩了的

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5楼2012-05-17 21:37:06

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tomorrowhl

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6楼: Originally posted by vetzhang at 2012-05-17 22:41:25:
黄色物质有可能是PH值不对啊，一般情况下用TCA即三氯乙酸浓缩后的蛋白，如果不用丙酮洗涤除去TCA残留，在加2倍或5倍SDS上样缓冲液前，不加一定量的NaOH中和TCA的话，用SDS样品处理液处理后的蛋白样品在上样前是黄 ...

但是用TCA对蛋白质完整性有影响的呀？

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8楼2012-05-18 09:12:32

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tomorrowhl

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10楼: Originally posted by colorfulmiao at 2012-05-18 10:02:34:
蛋白电泳蛋白浓度在0.1mg/mL都可以看到清晰条带，你可以试一下透析后不浓缩直接上样电泳，我所知道的是聚乙二醇两万浓缩后对电泳条带影响很大，所以我都不浓缩只透析继续祝成功