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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 就要被蛋白质电泳（SDS-PAGE）灭了，有图有真相，望高手指点
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zj408694018

金虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
用发酵液离心后装到透析袋中透析，然后连同透析袋一起用聚乙二醇吸水浓缩，完了之后跑电泳
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11楼2012-05-18 10:36:14
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c19345174

银虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
1、楼主的上样量浓度较大，发现有挤压其他泳道种样品的现象。建议降低上样的浓度。
2、个人感觉楼主的蛋白收到污染，需要进行下纯化处理。至于如何纯化根据实验室条件设备进行选择。
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12楼2012-05-18 10:58:22
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zhen_fang

银虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
浓度有问题，盐离子和pH更有问题
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13楼2012-05-18 13:44:35
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vetzhang

金虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
试试其他的浓缩方法吧。比如离心株膜法等。
透析的话试试用不含Na盐的含一定浓度甘油的Tris缓冲液试试，把PH值调整到6.5-8.5之间，再浓缩后试试。但总感觉PEG8000或20000对浓缩后的蛋白跑电泳有影响。

另外，TCA能够使蛋白变性，但是如果跑不连续电泳的话，用SDS上样缓冲液处理后的蛋白样品同样会变性的。所以用TCA法浓缩蛋白跑蛋白电泳是可行的。
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14楼2012-05-18 22:34:11
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tomorrowhl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
10楼: Originally posted by colorfulmiao at 2012-05-18 10:02:34:
蛋白电泳蛋白浓度在0.1mg/mL都可以看到清晰条带，你可以试一下透析后不浓缩直接上样电泳，我所知道的是聚乙二醇两万浓缩后对电泳条带影响很大，所以我都不浓缩只透析 继续祝成功

谢谢
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15楼2012-05-19 08:34:30
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tomorrowhl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
13楼: Originally posted by zhen_fang at 2012-05-18 13:44:35:
浓度有问题，盐离子和pH更有问题

16楼2012-05-19 08:35:09
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yang22181

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
其实你可以先SDS-PAGE先试一下！
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回复内容只代表本人观点，仅供参考&互助;共勉;齐上进
17楼2012-05-19 14:10:30
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huyueming321

铜虫 (小有名气)
处理样品时进水了？
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18楼2012-05-19 21:18:39
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tomorrowhl

新虫 (初入文坛)
引用回帖:
7楼: Originally posted by stone856 at 2012-05-18 06:11:33:
你的sample buffer和你同学用的一样吗？还是你自己配的？

建议你换一换试试。

一样的
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19楼2012-05-20 15:37:22
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tt121kl

木虫 (著名写手)

新闻不联播
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
明显上样量太少啊，蛋白浓度低
黄色可能是因为电泳过程中产热温度过高，可以拿冰降温
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越努力越幸运
20楼2012-05-20 19:30:34
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