就要被蛋白质电泳（SDS-PAGE）灭了，有图有真相，望高手指点 - 生物科学

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zj408694018

金虫 (正式写手)

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用发酵液离心后装到透析袋中透析，然后连同透析袋一起用聚乙二醇吸水浓缩，完了之后跑电泳

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11楼2012-05-18 10:36:14

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c19345174

银虫 (初入文坛)

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1、楼主的上样量浓度较大，发现有挤压其他泳道种样品的现象。建议降低上样的浓度。
2、个人感觉楼主的蛋白收到污染，需要进行下纯化处理。至于如何纯化根据实验室条件设备进行选择。

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12楼2012-05-18 10:58:22

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zhen_fang

银虫 (正式写手)

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浓度有问题，盐离子和pH更有问题

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13楼2012-05-18 13:44:35

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vetzhang

金虫 (小有名气)

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试试其他的浓缩方法吧。比如离心株膜法等。
透析的话试试用不含Na盐的含一定浓度甘油的Tris缓冲液试试，把PH值调整到6.5-8.5之间，再浓缩后试试。但总感觉PEG8000或20000对浓缩后的蛋白跑电泳有影响。

另外，TCA能够使蛋白变性，但是如果跑不连续电泳的话，用SDS上样缓冲液处理后的蛋白样品同样会变性的。所以用TCA法浓缩蛋白跑蛋白电泳是可行的。

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14楼2012-05-18 22:34:11

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tomorrowhl

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引用回帖:

10楼: Originally posted by colorfulmiao at 2012-05-18 10:02:34:
蛋白电泳蛋白浓度在0.1mg/mL都可以看到清晰条带，你可以试一下透析后不浓缩直接上样电泳，我所知道的是聚乙二醇两万浓缩后对电泳条带影响很大，所以我都不浓缩只透析继续祝成功