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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 就要被蛋白质电泳（SDS-PAGE）灭了，有图有真相，望高手指点
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tomorrowhl

新虫 (初入文坛)

[交流] 就要被蛋白质电泳（SDS-PAGE）灭了，有图有真相，望高手指点 已有21人参与

我的分离胶浓度为12，实验室其他人和我同时跑都能跑出清晰的条带。
marker和样品的量均为10微升。
左边两个是我的样，右边依次是marker、同学的样。我几经跑很多次了，每次都这样，这不是偶然，而是必然啊

我用细菌胞外产物跑PAGE，要不是没有条带，要不就是模糊的条带，maker和样品的泳道挨着就会被及变形，样品的泳道很宽，差不多是两个用到那么宽。用考马斯亮蓝测定蛋白质含量为1.78mg/ml。在电泳时会看到有黄色物质从样品泳道中析出。请各位高手指点迷津，小女子不胜感激啊！！！！
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1楼 2012-05-17 18:55:43
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vetzhang

金虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
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zhaohq1209: 金币+4, 鼓励交流哈~高手初现 2012-05-18 08:42:44
黄色物质有可能是PH值不对啊，一般情况下用TCA即三氯乙酸浓缩后的蛋白，如果不用丙酮洗涤除去TCA残留，在加2倍或5倍SDS上样缓冲液前，不加一定量的NaOH中和TCA的话，用SDS样品处理液处理后的蛋白样品在上样前是黄色的。还有如果自己配置的SDS上样缓冲液，如果PH值偏低也是显示有点黄色。但是以我们的经验来看，样品PH值稍微偏低基本不影响跑样。另外TCA法浓缩蛋白跑PAGE还是很漂亮的。
还有，我们实验室曾经有表达的很多上清蛋白在经PBS透析后经PEG8000浓缩，测定蛋白样品也挺大，但是跑蛋白胶就是像楼主似的模糊一片。怀疑是PEG8000的问题影响跑样。后改为TCA浓缩后大部分解决了这一问题。但是有的蛋白用硫酸铵浓缩后跑样还是有时候呈现模糊一片。仅限于个别蛋白，猜测可能与蛋白表达量低等有关。
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6楼2012-05-17 22:41:25
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chengjg

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhaohq1209: 金币+1, 有这种可能~ 2012-05-18 08:41:49
电泳槽是不是接触不好了 铂丝有问题 还是密封不好呀
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2楼2012-05-17 19:44:30
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qjy_134

铜虫 (小有名气)
★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
zhaohq1209: 金币+1, 跟样品的浓度关系应该不太大吧，关键是上样量吧 2012-05-18 08:42:16
样品缓冲液不对，还有样品浓度低
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3楼2012-05-17 19:53:51
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colorfulmiao

木虫 (小有名气)
★ ★ ★ ★ ★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
amisking: 金币+4, 鼓励发帖交流问题。 2012-05-17 20:22:19
黄色的物质？是你的样品中溶剂含有影响电泳结果的物质吧？有没有试过先透析再跑电泳呢？你的蛋白浓度比较大 透析应该不会影响蛋白显色，把样品透析好再跑电泳应该就好了
还有 跑电泳前先把样品离心一下 祝成功
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亦余心之所善兮虽九死其犹未悔
4楼2012-05-17 20:15:57
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