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就要被蛋白质电泳(SDS-PAGE)灭了,有图有真相,望高手指点 已有21人参与
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小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhaohq1209: 金币+4, 鼓励交流哈~高手初现 2012-05-18 08:42:44
小木虫: 金币+0.5, 给个红包,谢谢回帖
zhaohq1209: 金币+4, 鼓励交流哈~高手初现 2012-05-18 08:42:44
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黄色物质有可能是PH值不对啊,一般情况下用TCA即三氯乙酸浓缩后的蛋白,如果不用丙酮洗涤除去TCA残留,在加2倍或5倍SDS上样缓冲液前,不加一定量的NaOH中和TCA的话,用SDS样品处理液处理后的蛋白样品在上样前是黄色的。还有如果自己配置的SDS上样缓冲液,如果PH值偏低也是显示有点黄色。但是以我们的经验来看,样品PH值稍微偏低基本不影响跑样。另外TCA法浓缩蛋白跑PAGE还是很漂亮的。 还有,我们实验室曾经有表达的很多上清蛋白在经PBS透析后经PEG8000浓缩,测定蛋白样品也挺大,但是跑蛋白胶就是像楼主似的模糊一片。怀疑是PEG8000的问题影响跑样。后改为TCA浓缩后大部分解决了这一问题。但是有的蛋白用硫酸铵浓缩后跑样还是有时候呈现模糊一片。仅限于个别蛋白,猜测可能与蛋白表达量低等有关。 |
6楼2012-05-17 22:41:25
chengjg
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2楼2012-05-17 19:44:30
3楼2012-05-17 19:53:51
colorfulmiao
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4楼2012-05-17 20:15:57














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