| 查看: 1222 | 回复: 9 | ||
| 当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖 | ||
[求助]
载体酶切连接
|
||
|
这个问题已经要把握折磨死了，已经第四次失败了.... 载体5.4Kb， 使用XhoI酶切（50ul 体系，5ul 酶，3ug DNA， 5小时 37度，NEB 新购的酶），插入片段大小为1k。最初我使用1%的gel来cut片段，后来怕线性的未切割的和supercoil不能分离冲锋而造成割胶时候的误差后来换成0.6%的gel。我特意使用从gel上割下的载体直接电转移TOP 10 Electrocompetent cell， 来验证载体是否酶切完全。神啊，每次都是超多的克隆。结果我的载体酶连control自然也是很多克隆。我特意还将酶连产物进行了跑胶，只有两条带：载体和插入物。我也跑了载体切割前后的样品，线性载体快于supercoil，但蛮近。而且线性载体那条lane只有一条带，所以应该没有污染啊。 烦死了，求助啊...即使告诉我怎么让supercoil和线性载体跑的很开的办法也好。 顺便说下我的载体无论是用CIP还是antarctic phosphatase都试过 [ Last edited by 593318518 on 2012-5-3 at 09:17 ] |
回复此楼» 猜你喜欢
氢氧化钾活化操作
已经有19人回复
-
散金
已经有68人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有134人回复
-
生物质超级电容器
已经有0人回复
-
ALK5 高选择性小分子 LY-3200882：可放大合成路线与质控要点解析
已经有0人回复
-
AM630（CAS 164178-33-0）：CB2 选择性配体的实验使用与供应要点
已经有0人回复
-
ADC标杆分子T-DM1全解析：从结构设计到实验室应用的技术要点
已经有0人回复
-
HILIC磁珠研究蛋白组学怎么做？
已经有0人回复
-
His标签蛋白纯化怎么才能快？
已经有0人回复
-
WRN变构抑制剂HRO761：从D1/D2界面锁定到MSI合成致死的工具化合物深度解析
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 关于BstEII酶切位点连接的问题
已经有10人回复
- 片段连接到载体后，总在酶切位点处发生缺失
已经有5人回复
- T载体上的酶切位点
已经有4人回复
- pMD18-T载体连接了目的片段后双酶切鉴定出现了好多条带 怎么回事?
已经有6人回复
- 酶切及构建载体问题
已经有26人回复
- 纠结的分子实验，双酶切连不上，求助
已经有14人回复
- t载体酶切问题
已经有15人回复
- 酶切、连接和转化
已经有9人回复
- pET28a双酶切后连接目的基因，什么也不长。。。
已经有23人回复
- 有没有用过XmnI这个酶的?酶切后连接需要注意什么问题么？
已经有12人回复
- 双酶切之后，线状质粒的连接问题
已经有13人回复
- 双酶切后载体片段变小
已经有8人回复
- 求助：Xho 1 单酶切 载体连接
已经有19人回复
- 双酶切粘性末端连接不上
已经有21人回复
- 载体单酶切后去磷酸化还会自连吗？
已经有5人回复
- PCR ， 双酶切，连接问题
已经有17人回复
- 【求助】基因克隆T载体酶切问题等
已经有8人回复
- 双酶切连接表达载体，两个月都没做出来，问题到底出在哪里呢~？求指点
已经有52人回复
- 为什么我做的酶切连接总是不长斑呢？
已经有24人回复
susizheng
木虫 (著名写手)
我們是糖 甜到憂傷
- MolEPI: 10
- 应助: 130 (高中生)
- 贵宾: 0.008
- 金币: 4711.8
- 散金: 2273
- 红花: 56
- 帖子: 2319
- 在线: 742.9小时
- 虫号: 642666
- 注册: 2008-11-01
- 性别: GG
- 专业: 有机合成
3楼2012-05-03 11:07:13
hyacinth326
金虫 (正式写手)
- 应助: 74 (初中生)
- 金币: 2003.3
- 散金: 304
- 红花: 4
- 帖子: 394
- 在线: 1338.8小时
- 虫号: 1502977
- 注册: 2011-11-21
- 性别: MM
- 专业: 微生物资源与分类学
2楼2012-05-03 09:17:43
4楼2012-05-03 21:57:56
5楼2012-05-03 22:03:09
