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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细菌全基因组提取时需要加入RNA酶吗？
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我是驴

金虫 (小有名气)

[求助] 细菌全基因组提取时需要加入RNA酶吗？

请问大家，在提取混合体系细菌全基因组时需要加入RNA酶吗？
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努力向前
1楼 2012-04-04 19:07:53
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
还是消化一下比较好
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
2楼2012-04-04 20:13:28
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li77377

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助 2012-04-05 11:32:31
最好要加的，不加的话在电泳的时候200bp处有明显的条带。对后面的PCR也有不好的影响。或者考虑使用纯化试剂盒也行。
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3楼2012-04-04 21:47:02
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我是驴

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by li77377 at 2012-04-04 21:47:02:
最好要加的，不加的话在电泳的时候200bp处有明显的条带。对后面的PCR也有不好的影响。或者考虑使用纯化试剂盒也行。

那请问虫友，我是在提取DNA的哪一步加入RNase还是在获得DNA提取液后再加入RNase，还有RNase的浓度一般选择多少？多谢指点！
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努力向前
4楼2012-04-04 22:22:58
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freerain

禁虫 (职业作家)
本帖内容被屏蔽
5楼2012-04-05 00:15:46
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freerain

禁虫 (职业作家)
★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, Good! 2012-04-05 18:39:50
本帖内容被屏蔽
6楼2012-04-05 00:16:41
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zx6291

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+3, 鼓励分享～ 2012-04-05 18:40:15
不用加，有一快速提取法，供参考！
1. Add 100 μl of Solution A to the tail clip (2mm)

  2. Place in heat block (preheated to 95°C) for 60 minutes

  3. Add 100 μl of Solution B

  4. Vortex briefly

  5. Centrifuge at 2000rpm for 10 minutes

  6. Remove 100 μl of supernatant and store in new labeled tube at 4°C *

  7. Use 1μl per 25 μl PCR reaction



* Optional-1 μl of supernatant can be removed directly from samples and added to pcr reaction.



Solution A: 25mM NaOH/0.2mM EDTA



Solution B: 40mM Tris-HCl



Solutions A & B should be made up fresh each week, can be stored 1 week at 4°C



STOCK SOLUTIONS:

  1. 5M NaOH

  2. 0.5M EDTA, pH 8.0

  3. 1M Tris-HCl pH 8.0
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7楼2012-04-05 10:35:21
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tianliangtao

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+1, 鼓励 2012-04-05 18:40:26
加加更漂亮（加了跑电泳更好看一些，如果你加的量比较大建议最好是在用酚处理前加，当然也可以加到TE里面了）
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8楼2012-04-05 16:20:30
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scienzyme

铁杆木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
不加，我做过的以细菌基因组为模板的所有PCR，全都不加RNA酶。
加了只是电泳时漂亮一点。
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9楼2012-04-05 20:33:08
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real-gold

银虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by zx6291 at 2012-04-05 10:35:21:
不用加，有一快速提取法，供参考！
1. Add 100 μl of Solution A to the tail clip (2mm)

  2. Place in heat block (preheated to 95°C) for 60 minutes

  3. Add 100 μl of Solution B

  4. V ...

请问 这方法有出处否？
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10楼2012-04-05 21:23:31
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