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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细菌全基因组提取时需要加入RNA酶吗？
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我是驴

金虫 (小有名气)

[求助] 细菌全基因组提取时需要加入RNA酶吗？

请问大家，在提取混合体系细菌全基因组时需要加入RNA酶吗？
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努力向前
1楼 2012-04-04 19:07:53
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zx6291

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+3, 鼓励分享～ 2012-04-05 18:40:15
不用加，有一快速提取法，供参考！
1. Add 100 μl of Solution A to the tail clip (2mm)

  2. Place in heat block (preheated to 95°C) for 60 minutes

  3. Add 100 μl of Solution B

  4. Vortex briefly

  5. Centrifuge at 2000rpm for 10 minutes

  6. Remove 100 μl of supernatant and store in new labeled tube at 4°C *

  7. Use 1μl per 25 μl PCR reaction



* Optional-1 μl of supernatant can be removed directly from samples and added to pcr reaction.



Solution A: 25mM NaOH/0.2mM EDTA



Solution B: 40mM Tris-HCl



Solutions A & B should be made up fresh each week, can be stored 1 week at 4°C



STOCK SOLUTIONS:

  1. 5M NaOH

  2. 0.5M EDTA, pH 8.0

  3. 1M Tris-HCl pH 8.0
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7楼2012-04-05 10:35:21
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香菱儿

铁杆木虫 (著名写手)
还是消化一下比较好
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漫洒英雄泪，相离处士家。谢慈悲剃度在莲台下。没缘法转眼分离乍。赤条条来去无牵挂。那里讨烟蓑雨笠卷单行？一任俺芒鞋破钵随缘化！
2楼2012-04-04 20:13:28
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li77377

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木: 金币+1, 鼓励应助 2012-04-05 11:32:31
最好要加的，不加的话在电泳的时候200bp处有明显的条带。对后面的PCR也有不好的影响。或者考虑使用纯化试剂盒也行。
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3楼2012-04-04 21:47:02
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我是驴

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by li77377 at 2012-04-04 21:47:02:
最好要加的，不加的话在电泳的时候200bp处有明显的条带。对后面的PCR也有不好的影响。或者考虑使用纯化试剂盒也行。

那请问虫友，我是在提取DNA的哪一步加入RNase还是在获得DNA提取液后再加入RNase，还有RNase的浓度一般选择多少？多谢指点！
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努力向前
4楼2012-04-04 22:22:58
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