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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 细菌全基因组提取时需要加入RNA酶吗？
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我是驴

金虫 (小有名气)

[求助] 细菌全基因组提取时需要加入RNA酶吗？

请问大家，在提取混合体系细菌全基因组时需要加入RNA酶吗？
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努力向前
1楼2012-04-04 19:07:53
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zx6291

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
感谢参与，应助指数 +1
西瓜: 金币+3, 鼓励分享～ 2012-04-05 18:40:15
不用加，有一快速提取法，供参考！
1. Add 100 μl of Solution A to the tail clip (2mm)

  2. Place in heat block (preheated to 95°C) for 60 minutes

  3. Add 100 μl of Solution B

  4. Vortex briefly

  5. Centrifuge at 2000rpm for 10 minutes

  6. Remove 100 μl of supernatant and store in new labeled tube at 4°C *

  7. Use 1μl per 25 μl PCR reaction



* Optional-1 μl of supernatant can be removed directly from samples and added to pcr reaction.



Solution A: 25mM NaOH/0.2mM EDTA



Solution B: 40mM Tris-HCl



Solutions A & B should be made up fresh each week, can be stored 1 week at 4°C



STOCK SOLUTIONS:

  1. 5M NaOH

  2. 0.5M EDTA, pH 8.0

  3. 1M Tris-HCl pH 8.0
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7楼2012-04-05 10:35:21
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zx6291

铜虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★
西瓜: 金币+1, 鼓励交流 2012-04-06 17:38:49
我是驴: 金币+3, ★★★很有帮助 2012-04-06 21:53:25
出处为http://labs.pharmacology.ucla.ed ... TION%20PROTOCOL.doc
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我是驴
11楼2012-04-06 14:15:59
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