24小时热门版块排行榜    

查看: 3434  |  回复: 7
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

oceanworld

木虫 (小有名气)

[求助] 引物加保护碱基

各位大侠请问一下,我要做双酶切,设计了一对引物加了保护碱基和酶切位点,但是却扩增不出正确的目的片段,用没加保护碱基和酶切位点的引物能够扩增出正确的目的片段,请问这是怎么回事呢?下面是我设计的加了保护碱基和酶切位点的引物!谢谢各位了!


5’  CCGCTCGAGACTTTTGGCCAGCTGCCTCT 3’    xhoI
5’  CCCAAGCTTATCATCAACAGGGAACTGTTG 3’     HindIII
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐,对您同样有帮助:

已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

分子菜鸟

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与,应助指数 +1
oceanworld: 金币+2, 有帮助 2012-04-02 15:37:51
先用没有酶切位点的做一轮PCR,产物稀释一定倍数(几十至一百)再作为模板做第二轮PCR就可以了。
7楼2012-04-01 11:07:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

ilaveu

木虫 (著名写手)

★ ★
amisking: 金币+2, 鼓励发帖交流!欢迎发表更多的见解! 2012-03-30 20:15:52
看着设计上没什么问题,如果引物没问题的话,应该能P出来才对
PCR有时候就是不稳定,高手也常常遇到P不出来的情况,换个条件就能出来
2楼2012-03-30 19:16:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

oceanworld

木虫 (小有名气)

引用回帖:
2楼: Originally posted by ilaveu at 2012-03-30 19:16:35:
看着设计上没什么问题,如果引物没问题的话,应该能P出来才对
PCR有时候就是不稳定,高手也常常遇到P不出来的情况,换个条件就能出来

谢谢,我在换个条件试试
3楼2012-03-31 08:28:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lincy2010

银虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★ ★ ★ ★ ★ ★
感谢参与,应助指数 +1
zhaohq1209: 金币+2, 有道理,先连在T载体删,然后再酶切,就不存在保护碱基的问题了 2012-03-31 21:33:47
oceanworld: 金币+5, ★★★很有帮助 2012-04-01 08:13:15
其实你既然有没加保护碱基的引物,并且能P得很好,可以考虑直接连在平端载体上,比如通过T/A克隆连在T载体上,再切下来
耐得住寂寞,方能遇见繁华
4楼2012-03-31 19:47:58
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
信息提示
请填处理意见