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oceanworld

木虫 (小有名气)

[求助] 引物加保护碱基

各位大侠请问一下,我要做双酶切,设计了一对引物加了保护碱基和酶切位点,但是却扩增不出正确的目的片段,用没加保护碱基和酶切位点的引物能够扩增出正确的目的片段,请问这是怎么回事呢?下面是我设计的加了保护碱基和酶切位点的引物!谢谢各位了!


5’  CCGCTCGAGACTTTTGGCCAGCTGCCTCT 3’    xhoI
5’  CCCAAGCTTATCATCAACAGGGAACTGTTG 3’     HindIII
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分子菜鸟

木虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

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oceanworld: 金币+2, 有帮助 2012-04-02 15:37:51
先用没有酶切位点的做一轮PCR,产物稀释一定倍数(几十至一百)再作为模板做第二轮PCR就可以了。
7楼2012-04-01 11:07:42
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