应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求鉴定PCR扩增电泳图
91/1返回列表
查看: 2177  |  回复: 8
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

baby1_9253344

金虫 (小有名气)

[求助] 求鉴定PCR扩增电泳图

如图，扩增小片段（200多bp），0为空白，1到7为样品，右边俩位markerDL2000。
不是生物专业的，不晓得这算扩增出来了吗？
还有，最上面的那个应该是引物二聚体吗（0号样品也有的那个条带）？
如果要胶回收，切胶的时候要把拖尾的部分也切了吗？
如果要切胶回收，用EB染色紫外光下切，不能超过多久？（怕紫外照久了突变）

门外汉。。。问题比较多。。。谢谢大家了！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-03-13 20:51:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

fungixx

至尊木虫 (文坛精英)

优秀版主优秀版主优秀版主

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
baby1_9253344(金币+1): 2012-03-13 23:15:31
这点用质量也太差了，marker都这么模糊
1. 0空白是什么，没有模板么，还是没有引物，还是怎么的？
2. 我想说，这很可能不是你要的带的。你跑小片段的时候，胶浓度高点，2%或许可能更好些
3. 紫外下切割要不了多长时间吧，一般没事的，毕竟一般切胶的紫外强度不会很大的，尽量快些就好了。
4.小片段有时候不是很好回收，找个适合小片段的试剂盒
赞一下 回复此楼
几年前踏上火车那一刻都还没有意识到,从此故乡只有冬夏,再无春秋
2楼2012-03-13 22:08:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baby1_9253344

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fungixx at 2012-03-13 22:08:23:
这点用质量也太差了，marker都这么模糊
1. 0空白是什么，没有模板么，还是没有引物，还是怎么的？
2. 我想说，这很可能不是你要的带的。你跑小片段的时候，胶浓度高点，2%或许可能更好些
3. 紫外下切割要不了多 ...

谢谢你的耐心解答~

回复你的前两点。

1,空白是模板是无菌水，其他都加了的。
2,胶浓度就是2%的。

想请教一下，为什么不是我要的条带呢？
赞一下 回复此楼
3楼2012-03-13 23:13:21
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baby1_9253344

金虫 (小有名气)
引用回帖:
2楼: Originally posted by fungixx at 2012-03-13 22:08:23:
这点用质量也太差了，marker都这么模糊
1. 0空白是什么，没有模板么，还是没有引物，还是怎么的？
2. 我想说，这很可能不是你要的带的。你跑小片段的时候，胶浓度高点，2%或许可能更好些
3. 紫外下切割要不了多 ...

感觉好像是因为胶做的比较厚所以拍照是灰色的，跑0.8%胶的时候就比较亮。
赞一下 回复此楼
4楼2012-03-13 23:17:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baby1_9253344

金虫 (小有名气)
继续求鉴定
回复此楼
5楼2012-03-14 09:37:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

huangk1199

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
baby1_9253344(金币+1): 2012-03-14 14:10:31
1.拖尾严重，适当提高退火温度，减少循环次数。
2.二聚体严重，建议减少引物的浓度，酶保护剂BSA之类的有必要添加。
3.建议你把你的PCR条件晒晒，大家好做具体分析。
赞一下 回复此楼
一路蚯蚓
6楼2012-03-14 14:05:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baby1_9253344

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by huangk1199 at 2012-03-14 14:05:00:
1.拖尾严重，适当提高退火温度，减少循环次数。
2.二聚体严重，建议减少引物的浓度，酶保护剂BSA之类的有必要添加。
3.建议你把你的PCR条件晒晒，大家好做具体分析。

Taq酶5U/ul加0.1uL，10XBuffer（无Mg）2.5uL，MgCl225mM加2.5uL, dNTP 2.5mM加2uL, 引物10mM各1uL,模板是菌液（枯草菌）,1uL.
升温条件：
94,30s; 94,30s,   52.7, 30s   72, 30s;(循环30次)； 72,5 min

退火温度按oligo6引物分析得的，上游引物33bp（含NdeI位点，保护碱基加的多，所以长）,下游引物27bp。
赞一下 回复此楼
7楼2012-03-14 14:18:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

baby1_9253344

金虫 (小有名气)
8楼2012-03-14 21:36:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jocelyn2012

新虫 (初入文坛)

【答案】应助回帖

★ ★ ★
baby1_9253344: 金币+3 2012-05-03 14:35:13
从图上看不是非常特异，先提高退火温度试试，软件给的退火温度只供参考，不同软件算出来有时候很不一样。还有下次把胶图正放，即胶孔在上，别问我为什么，习惯。先确定下根据marker，出现的条带大小正确吗？若正确就是PCR条件优化的问题。别只给个DL2000啊，谁记得住那么多marker的条带，可以标下每条的大小。
可能不是很用，但可以帮你把问题弄清楚，找出症结所在，就比较知道下一步要做什么了
赞一下 回复此楼
9楼2012-05-03 14:07:25
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 baby1_9253344 的主题更新
91/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 0703化学336分求调剂 +3 zbzihdhd 2026-03-15 4/200 2026-03-16 23:52 by zbzihdhd
[考研] 302求调剂 +3 小贾同学123 2026-03-15 5/250 2026-03-16 20:39 by zhq0425
[考研] 材料专硕306英一数二 +4 z1z2z3879 2026-03-16 6/300 2026-03-16 19:38 by z1z2z3879
[考研] 085600材料与化工 求调剂 +13 enenenhui 2026-03-13 14/700 2026-03-16 15:19 by 了了了了。。
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 290求调剂 +5 孔志浩 2026-03-12 10/500 2026-03-16 09:01 by 余晖&
[考研] 材料工程专硕274一志愿211求调剂 +5 薛云鹏 2026-03-15 5/250 2026-03-15 20:38 by Logic2024
[考研] 265求调剂 +4 威化饼07 2026-03-12 4/200 2026-03-14 17:23 by userper
[考研] 一志愿哈工大材料324分求调剂 +5 闫旭东 2026-03-14 5/250 2026-03-14 14:53 by 木瓜膏
[基金申请] 有必要更换申报口吗 20+3 fannyamoy 2026-03-11 3/150 2026-03-14 00:52 by zhanghaozhu
[考研] 一志愿湖师大化学289求调剂 +6 XMCMM3.14159 2026-03-10 6/300 2026-03-14 00:28 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 329求调剂 +3 miaodesi 2026-03-12 4/200 2026-03-13 20:53 by 18595523086
[硕博家园] 085600 260分求调剂 +3 天空还下雨么 2026-03-13 5/250 2026-03-13 18:46 by 天空还下雨么
[考研] 293求调剂 +3 世界首富 2026-03-11 3/150 2026-03-13 16:27 by JourneyLucky
[考研] 302求调剂 +6 负心者当诛 2026-03-11 6/300 2026-03-13 16:11 by JourneyLucky
[考研] 307求调剂 +5 超级伊昂大王 2026-03-12 5/250 2026-03-13 15:56 by 棒棒球手
[考研] 314求调剂 +7 无懈可击的巨人 2026-03-12 7/350 2026-03-13 15:40 by JourneyLucky
[考研] 工科0856专硕化学工程269能调剂吗 +10 我想读研11 2026-03-10 10/500 2026-03-13 10:14 by Yuyi.
[考研] 收调剂 +7 调剂的考研学生 2026-03-10 7/350 2026-03-10 17:57 by 麦茶汤圆
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭