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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 蛋白电泳上样
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丫头7976

铜虫 (正式写手)

[交流] 蛋白电泳上样

各位高手大侠，我昨天做蛋白纯化，浓缩，更换buffer，之后跑电泳，上样，与5XSDS混匀之后，用枪吸上样，却发现吸不上来，都是气泡，请问有人遇到过这种情况吗？这是怎么回事？郁闷
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1楼 2012-03-12 16:04:49
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jihuasong

铁虫 (初入文坛)
★ ★
丫头7976(金币+1): 谢谢参与
丫头7976(金币+1): 我怎么会第一次跑胶，哥哥我怎么也不止跑过几十次了，从来没遇到过这种情况i，就是常规操作的，不知道今天怎么了，第一次遇到这种情况，难道是表面活性剂太多了？ 2012-03-12 17:00:21
兄台第一次跑蛋白胶？样品直接与5*SDS loading buffer混匀后在沸水中煮十分钟变性就可以直接上样了，如果气泡多你不妨可以离心一下，但一般我们跑胶时均不会出现你说的那种情况，兄台可再参考一些文献具体看看你的操作步骤有木有什么问题~
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2楼2012-03-12 16:20:36
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)
★
丫头7976(金币+1): 谢谢参与
以前做核酸胶的时候也碰到过，PCR产物跟loading buffer混匀后用移液器吸打过程容易生成大量气泡，导致无法上样。记得当时老师给的解释是样品中含有蛋白杂质，而蛋白比较容易起泡泡。现在是蛋白上样了，真不知道该怎么解释了，呵呵呵
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3楼2012-03-12 17:39:22
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biomater

银虫 (著名写手)
★
丫头7976(金币+1): 谢谢参与
离心就应该没气泡了，用微量加样器试试。。。。
loadingbuff中的sds加多了？不可能啊。。。
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4楼2012-03-13 09:15:49
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小小微生物

金虫 (正式写手)
★
丫头7976(金币+1): 谢谢参与
楼主 ，离心后，还是要混匀的
你下次混匀的时候要仔细操作，枪头里面在混匀的时候不要吸进空气，再就是慢慢的吸吹，绝对不会出现你那种情况了
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5楼2012-03-13 09:44:49
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小小微生物

金虫 (正式写手)
对了忘记说了，SDS也可以产生泡沫的，而且SDS发粘，我亲手试过，弄在手上粘不拉及的，所以在加混有SDS的非蛋白样品时有泡沫不一定是有蛋白杂质
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6楼2012-03-13 09:47:53
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plx1989117

木虫 (正式写手)
★
丫头7976(金币+1): 谢谢参与
你是不是把样煮干了？
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7楼2012-03-13 12:13:42
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yangchaoc

金虫 (著名写手)
★
丫头7976(金币+1): 谢谢参与
你是不是把样煮干了？
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9楼2012-03-13 22:31:43
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xbingfeng

新虫 (初入文坛)
★
丫头7976(金币+1): 谢谢参与
煮了就没泡了。。。
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10楼2012-03-13 23:43:24
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jianqiangsui

金虫 (小有名气)
★
丫头7976(金币+1): 谢谢参与
我认为你这种情况，应该是SDS的问题，10%的SDS在配制过程中就容易起泡，不好定容。我在做SDS-PAGE时，样品是要溶解在---样品溶解液中的，其配制方法是：10mL样品溶解液中包含2.5mL浓缩胶缓冲液、2.0mL甘油、4.0mL 10％SDS、0.5mL 0.1％溴酚蓝、1.0mL β-巯基乙醇。
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11楼2012-03-14 16:38:57
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soholj

至尊木虫 (著名写手)
★
小木虫(金币+0.5): 给个红包，谢谢回帖
可以煮下试试，一般纯蛋白的话不会出现这情况。。
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12楼2012-03-14 21:47:55
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75372017

木虫 (初入文坛)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
从4度取出来后是很难吸上来的，你可以37度加热，也可以再室温下放置一段时间，再震荡一下就好了
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13楼2012-03-15 11:25:33
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zx1984

木虫 (正式写手)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
煮完后，在冰上放3-5min，然后用离心机甩一下，不要太快，容易沉淀，然后就可以上样了，这样产生气泡。
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15楼2012-03-21 08:45:03
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glwstudy

银虫 (小有名气)
★
小木虫: 金币+0.5, 给个红包，谢谢回帖
楼主，SDS作为去垢剂再煮沸后定会产生泡沫，离心下就好！
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16楼2012-04-28 21:18:28
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clarktao8楼
2012-03-13 15:10   回复  
丫头7976(金币+1): 谢谢参与
zzk12314楼
2012-03-15 14:27   回复  
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