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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告
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丫头7976

铜虫 (正式写手)


[交流] 蛋白电泳上样

各位高手大侠,我昨天做蛋白纯化,浓缩,更换buffer,之后跑电泳,上样,与5XSDS混匀之后,用枪吸上样,却发现吸不上来,都是气泡,请问有人遇到过这种情况吗?这是怎么回事?郁闷
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joan198108

铁杆木虫 (正式写手)



丫头7976(金币+1): 谢谢参与
以前做核酸胶的时候也碰到过,PCR产物跟loading buffer混匀后用移液器吸打过程容易生成大量气泡,导致无法上样。记得当时老师给的解释是样品中含有蛋白杂质,而蛋白比较容易起泡泡。现在是蛋白上样了,真不知道该怎么解释了,呵呵呵
3楼2012-03-12 17:39:22
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jihuasong

铁虫 (初入文坛)


★ ★
丫头7976(金币+1): 谢谢参与
丫头7976(金币+1): 我怎么会第一次跑胶,哥哥我怎么也不止跑过几十次了,从来没遇到过这种情况i,就是常规操作的,不知道今天怎么了,第一次遇到这种情况,难道是表面活性剂太多了? 2012-03-12 17:00:21
兄台第一次跑蛋白胶?样品直接与5*SDS loading buffer混匀后在沸水中煮十分钟变性就可以直接上样了,如果气泡多你不妨可以离心一下,但一般我们跑胶时均不会出现你说的那种情况,兄台可再参考一些文献具体看看你的操作步骤有木有什么问题~
2楼2012-03-12 16:20:36
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biomater

银虫 (著名写手)



丫头7976(金币+1): 谢谢参与
离心就应该没气泡了,用微量加样器试试。。。。
loadingbuff中的sds加多了?不可能啊。。。
4楼2012-03-13 09:15:49
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小小微生物

金虫 (正式写手)



丫头7976(金币+1): 谢谢参与
楼主 ,离心后,还是要混匀的
你下次混匀的时候要仔细操作,枪头里面在混匀的时候不要吸进空气,再就是慢慢的吸吹,绝对不会出现你那种情况了
5楼2012-03-13 09:44:49
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