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蛋白电泳上样
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丫头7976
铜虫
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虫号: 765213
[交流]
蛋白电泳上样
各位高手大侠,我昨天做蛋白纯化,浓缩,更换buffer,之后跑电泳,上样,与5XSDS混匀之后,用枪吸上样,却发现吸不上来,都是气泡,请问有人遇到过这种情况吗?这是怎么回事?郁闷
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zzk123
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2012-03-12 16:04:49
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jianqiangsui
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★
丫头7976(金币+1): 谢谢参与
我认为你这种情况,应该是SDS的问题,10%的SDS在配制过程中就容易起泡,不好定容。我在做SDS-PAGE时,样品是要溶解在---样品溶解液中的,其配制方法是:10mL样品溶解液中包含2.5mL浓缩胶缓冲液、2.0mL甘油、4.0mL 10%SDS、0.5mL 0.1%溴酚蓝、1.0mL β-巯基乙醇。
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11楼
2012-03-14 16:38:57
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jihuasong
铁虫
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★ ★
丫头7976(金币+1): 谢谢参与
丫头7976(金币+1): 我怎么会第一次跑胶,哥哥我怎么也不止跑过几十次了,从来没遇到过这种情况i,就是常规操作的,不知道今天怎么了,第一次遇到这种情况,难道是表面活性剂太多了?
2012-03-12 17:00:21
兄台第一次跑蛋白胶?样品直接与5*SDS loading buffer混匀后在沸水中煮十分钟变性就可以直接上样了,如果气泡多你不妨可以离心一下,但一般我们跑胶时均不会出现你说的那种情况,兄台可再参考一些文献具体看看你的操作步骤有木有什么问题~
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2楼
2012-03-12 16:20:36
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joan198108
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★
丫头7976(金币+1): 谢谢参与
以前做核酸胶的时候也碰到过,PCR产物跟loading buffer混匀后用移液器吸打过程容易生成大量气泡,导致无法上样。记得当时老师给的解释是样品中含有蛋白杂质,而蛋白比较容易起泡泡。现在是蛋白上样了,真不知道该怎么解释了,呵呵呵
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3楼
2012-03-12 17:39:22
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biomater
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丫头7976(金币+1): 谢谢参与
离心就应该没气泡了,用微量加样器试试。。。。
loadingbuff中的sds加多了?不可能啊。。。
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4楼
2012-03-13 09:15:49
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