应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 目的蛋白序列连接pet15b测序结果正确为何不表达
51/1返回列表
查看: 3011  |  回复: 7
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

lamprr

银虫 (初入文坛)

[求助] 目的蛋白序列连接pet15b测序结果正确为何不表达

最近作表达将质粒（测序结果正确）转入bl21中，摇菌2小时，加iptg1mM，37度4小时。没有任何特异条带，是怎么回事呢？请问菌种要求高么？我们的Bl21实验室用很久了，是不是菌种不行呢？还有什么因素应该考虑？请各位高手帮我分析一下，谢谢啦
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

杂项 测序相关问题

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2012-03-02 11:19:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lamprr

银虫 (初入文坛)
引用回帖:
楼: Originally posted by whb21 at 2012-03-02 12:14:14:
诱导温度有点高，通常是30度左右，但不至于导致目标蛋白完全不表达，建议你将诱导后的菌体破碎离心，将上清和沉淀都跑胶看看，是不是有包涵体表达。祝好运！

我的处理方法是将菌体离心，用8m尿素溶液200微升溶解，一般处理过夜，再加上样缓冲液，按说包涵体都应该在里面啊
赞一下 回复此楼
3楼2012-03-02 17:12:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答

whb21

木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1
诱导温度有点高，通常是30度左右，但不至于导致目标蛋白完全不表达，建议你将诱导后的菌体破碎离心，将上清和沉淀都跑胶看看，是不是有包涵体表达。祝好运！
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2012-03-02 12:14:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lxj341401

至尊木虫 (著名写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
小丹木木(金币+1, 专家考核): 2012-03-03 11:46:36
测序正确还要看看读码框对不对？读码框对了也不一定就能表达，还有mRNA的二级结构、要表达蛋白是否有毒性等也影响表达。
建议诱导后直接全细胞电泳，跑菌体蛋白，即使形成包涵体也能跑出来的，不用破碎后上清和沉淀分别跑胶，现在只是看有没有诱导表达而已。
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2012-03-02 20:37:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

酶切专家

金虫 (小有名气)

【答案】应助回帖

★ ★
感谢参与，应助指数 +1
lamprr(金币+2): 谢谢 你金币少 给你了 别人别有意见哦 2012-03-03 21:46:45
你确定你菌株酶问题？应该用BL21(DE3)，而不是BL21, 或者是其它含有DE3的菌株
赞一下(1人) 回复此楼
5楼2012-03-02 22:23:46
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 8 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 师弟论文见刊大半年才想起来申请专利，还能抢救一下吗？ +5 13108017953 2026-09-21 5/250 2026-09-27 16:46 by Leogzhya
[教师之家] 某top大学教授说“能够在市场中兑现的能力才是真能力”无比同意！ +3 zju2000 2026-09-26 3/150 2026-09-27 16:26 by lala1008
[博后之家] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:42 by 4IW0sJvtEqX8
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:26 by 4IW0sJvtEqX8
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +3 ViqFlLSxHDGt 2026-09-26 3/150 2026-09-27 10:21 by 4IW0sJvtEqX8
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 oeyPlfmMUpOC 2026-09-26 3/150 2026-09-27 09:13 by 4IW0sJvtEqX8
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 4/200 2026-09-27 06:42 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 GxESXJmptOtQ 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:32 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:08 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 06:05 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:56 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +5 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:53 by XgCC8uTcwILl
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:50 by XgCC8uTcwILl
[公派出国] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 4/200 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[考博] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 3/150 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 5/250 2026-09-27 05:44 by XgCC8uTcwILl
[论文投稿] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 vQZoDrrm7mUF 2026-09-25 6/300 2026-09-27 05:42 by XgCC8uTcwILl
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 5/250 2026-09-25 11:19 by yhq9807
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +4 PGTSwSC3F6nQ 2026-09-24 7/350 2026-09-25 11:18 by yhq9807
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭