应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】测序结果没有道理
111/1返回列表
查看: 1216  |  回复: 10
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

vs570588

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】测序结果没有道理

我用PMD19-T载体，做克隆，现在序列结果出来，但是现在要么就是仅有载体结合目的基因处序列，要么就是既没有引物序列也没有载体结合目的基因处的序列。20个样品，都是这种结果。送到南京某家测序公司，前段时间我们这也有人送过去，还是这结果。急死我了，大家看这是啥原因，我用通用引物，做了菌落PCR，效果很好，固体培养基中加的是氨苄青霉素，也都长出来了。大家说说看呀？如果真没有办法，是不要重新做克隆？
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-03-10 21:12:20
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
片段很长么？
回复此楼
2楼2011-03-10 21:16:10
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vs570588

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-03-10 21:16:10:
片段很长么？

不是很长，目的基因片段大约200bp
赞一下 回复此楼
3楼2011-03-10 21:37:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by vs570588 at 2011-03-10 21:37:59:
不是很长，目的基因片段大约200bp

换公司测序。。。比如英骏、生工、华大等去测。先别急着再做克隆。
赞一下 回复此楼
4楼2011-03-10 21:43:07
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

phoenix211

金虫 (小有名气)
可以换家测下看。我们实验室一般找华大，结果都还不错。
赞一下 回复此楼
5楼2011-03-11 01:36:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vs570588

木虫 (正式写手)
大家说说可能是我哪一步试验出差错了
赞一下 回复此楼
6楼2011-03-11 08:38:29
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vs570588

木虫 (正式写手)
顺便说下我的测序是南京金斯瑞，大家有人在这家测序的吗
赞一下 回复此楼
7楼2011-03-11 08:40:24
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhangby2002

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by vs570588 at 2011-03-10 21:12:20:
我用PMD19-T载体，做克隆，现在序列结果出来，但是现在要么就是仅有载体结合目的基因处序列，要么就是既没有引物序列也没有载体结合目的基因处的序列。20个样品，都是这种结果。送到南京某家测序公司，前段时间我 ...

我和你的问题一样，做啦酶切鉴定，送到华大测序，结果也不好~
赞一下 回复此楼
8楼2011-03-11 09:53:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

vs570588

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhangby2002 at 2011-03-11 09:53:54:
我和你的问题一样，做啦酶切鉴定，送到华大测序，结果也不好~

那你是怎样处理的，是重新克隆吗?
赞一下 回复此楼
9楼2011-03-11 13:39:53
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hello466725

金虫 (初入文坛)
我这都送上海生工
结果还不错
赞一下 回复此楼
10楼2011-03-11 13:52:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yabxxh

木虫 (正式写手)
哥们，引物设计不好的话，你这200bp的片段太容易出假阳性了，建议还是做个双酶切，以确定你的载体上连入了目的片段，菌落PCR只能作为初步的范围判断，比较有说服力的还是酶切和测序了，好运
赞一下 回复此楼
11楼2011-03-11 14:32:03
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 学员BmWXvC 的主题更新
111/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭