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vs570588

木虫 (正式写手)


[交流] 【求助/交流】测序结果没有道理

我用PMD19-T载体,做克隆,现在序列结果出来,但是现在要么就是仅有载体结合目的基因处序列,要么就是既没有引物序列也没有载体结合目的基因处的序列。20个样品,都是这种结果。送到南京某家测序公司,前段时间我们这也有人送过去,还是这结果。急死我了,大家看这是啥原因,我用通用引物,做了菌落PCR,效果很好,固体培养基中加的是氨苄青霉素,也都长出来了。大家说说看呀?如果真没有办法,是不要重新做克隆?
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片段很长么?
2楼2011-03-10 21:16:10
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vs570588

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-03-10 21:16:10:
片段很长么?

不是很长,目的基因片段大约200bp
3楼2011-03-10 21:37:59
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引用回帖:
Originally posted by vs570588 at 2011-03-10 21:37:59:
不是很长,目的基因片段大约200bp

换公司测序。。。比如英骏、生工、华大等去测。先别急着再做克隆。
4楼2011-03-10 21:43:07
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phoenix211

金虫 (小有名气)


可以换家测下看。我们实验室一般找华大,结果都还不错。
5楼2011-03-11 01:36:00
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vs570588

木虫 (正式写手)


大家说说可能是我哪一步试验出差错了
6楼2011-03-11 08:38:29
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vs570588

木虫 (正式写手)


顺便说下我的测序是南京金斯瑞,大家有人在这家测序的吗
7楼2011-03-11 08:40:24
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zhangby2002

银虫 (小有名气)


引用回帖:
Originally posted by vs570588 at 2011-03-10 21:12:20:
我用PMD19-T载体,做克隆,现在序列结果出来,但是现在要么就是仅有载体结合目的基因处序列,要么就是既没有引物序列也没有载体结合目的基因处的序列。20个样品,都是这种结果。送到南京某家测序公司,前段时间我 ...

我和你的问题一样,做啦酶切鉴定,送到华大测序,结果也不好~
8楼2011-03-11 09:53:54
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vs570588

木虫 (正式写手)


引用回帖:
Originally posted by zhangby2002 at 2011-03-11 09:53:54:
我和你的问题一样,做啦酶切鉴定,送到华大测序,结果也不好~

那你是怎样处理的,是重新克隆吗?
9楼2011-03-11 13:39:53
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hello466725

金虫 (初入文坛)


我这都送上海生工
结果还不错
10楼2011-03-11 13:52:18
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yabxxh

木虫 (正式写手)


哥们,引物设计不好的话,你这200bp的片段太容易出假阳性了,建议还是做个双酶切,以确定你的载体上连入了目的片段,菌落PCR只能作为初步的范围判断,比较有说服力的还是酶切和测序了,好运
11楼2011-03-11 14:32:03
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