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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】测序结果没有道理
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vs570588

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】测序结果没有道理

我用PMD19-T载体，做克隆，现在序列结果出来，但是现在要么就是仅有载体结合目的基因处序列，要么就是既没有引物序列也没有载体结合目的基因处的序列。20个样品，都是这种结果。送到南京某家测序公司，前段时间我们这也有人送过去，还是这结果。急死我了，大家看这是啥原因，我用通用引物，做了菌落PCR，效果很好，固体培养基中加的是氨苄青霉素，也都长出来了。大家说说看呀？如果真没有办法，是不要重新做克隆？
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1楼 2011-03-10 21:12:20
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
片段很长么？
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2楼2011-03-10 21:16:10
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vs570588

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by brightfuture01 at 2011-03-10 21:16:10:
片段很长么？

不是很长，目的基因片段大约200bp
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3楼2011-03-10 21:37:59
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brightfuture01

木虫之王 (文坛精英)
引用回帖:
Originally posted by vs570588 at 2011-03-10 21:37:59:
不是很长，目的基因片段大约200bp

换公司测序。。。比如英骏、生工、华大等去测。先别急着再做克隆。
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4楼2011-03-10 21:43:07
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phoenix211

金虫 (小有名气)
可以换家测下看。我们实验室一般找华大，结果都还不错。
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5楼2011-03-11 01:36:00
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vs570588

木虫 (正式写手)
大家说说可能是我哪一步试验出差错了
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6楼2011-03-11 08:38:29
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vs570588

木虫 (正式写手)
顺便说下我的测序是南京金斯瑞，大家有人在这家测序的吗
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7楼2011-03-11 08:40:24
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zhangby2002

银虫 (小有名气)
引用回帖:
Originally posted by vs570588 at 2011-03-10 21:12:20:
我用PMD19-T载体，做克隆，现在序列结果出来，但是现在要么就是仅有载体结合目的基因处序列，要么就是既没有引物序列也没有载体结合目的基因处的序列。20个样品，都是这种结果。送到南京某家测序公司，前段时间我 ...

我和你的问题一样，做啦酶切鉴定，送到华大测序，结果也不好~
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8楼2011-03-11 09:53:54
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vs570588

木虫 (正式写手)
引用回帖:
Originally posted by zhangby2002 at 2011-03-11 09:53:54:
我和你的问题一样，做啦酶切鉴定，送到华大测序，结果也不好~

那你是怎样处理的，是重新克隆吗?
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9楼2011-03-11 13:39:53
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hello466725

金虫 (初入文坛)
我这都送上海生工
结果还不错
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10楼2011-03-11 13:52:18
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yabxxh

木虫 (正式写手)
哥们，引物设计不好的话，你这200bp的片段太容易出假阳性了，建议还是做个双酶切，以确定你的载体上连入了目的片段，菌落PCR只能作为初步的范围判断，比较有说服力的还是酶切和测序了，好运
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11楼2011-03-11 14:32:03
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