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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 【求助/交流】测序结果没有道理
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vs570588

木虫 (正式写手)

[交流] 【求助/交流】测序结果没有道理

我用PMD19-T载体，做克隆，现在序列结果出来，但是现在要么就是仅有载体结合目的基因处序列，要么就是既没有引物序列也没有载体结合目的基因处的序列。20个样品，都是这种结果。送到南京某家测序公司，前段时间我们这也有人送过去，还是这结果。急死我了，大家看这是啥原因，我用通用引物，做了菌落PCR，效果很好，固体培养基中加的是氨苄青霉素，也都长出来了。大家说说看呀？如果真没有办法，是不要重新做克隆？
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1楼 2011-03-10 21:12:20
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yabxxh

木虫 (正式写手)
哥们，引物设计不好的话，你这200bp的片段太容易出假阳性了，建议还是做个双酶切，以确定你的载体上连入了目的片段，菌落PCR只能作为初步的范围判断，比较有说服力的还是酶切和测序了，好运
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11楼2011-03-11 14:32:03
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