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weining1203新虫 (小有名气)
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关于pET-32a表达的一些问题
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我的目的蛋白大概78Kd，使用pET-32a表达载体，酶切位点为sacI和Xhol， 上游引物 5G GAGCTC（SacI）ATGGTTGCAGCAGCAGAAAT3 下游引物 5CCG CTCGAG（Xhol）TCAGAATGGGCCAGGAGTTC3 设计的引物上游有起始密码子，下游有终止密码子，那么最终表达的蛋白到底有多大呢？求大神指点 |
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| ……你都说你目的蛋白78kd了，那你表达出来的应该就是78kd+HIS标签的大小. |
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weining1203
2楼2012-10-09 15:13:15
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做SDS-PAGE大概的显示条带为90～100KDa. 在你的目的蛋白前面还有约170个氨基酸，包括Trx.TAG, S.TAG, His.TAG等蛋白序列。 核对pET-32a质粒图谱算出来。 |
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6楼2012-10-11 16:12:56
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| 楼上说得对，pET32载体上还有Trx.tag, S.tag, His.tag序列，根据pET系统的说明书，插入大小约为20.4 kDa，加上原来的78 kDa，大约100 kDa。 |
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