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weining1203

新虫 (小有名气)

[求助] 关于pET-32a表达的一些问题

我的目的蛋白大概78Kd,使用pET-32a表达载体,酶切位点为sacI和Xhol,
上游引物 5G GAGCTC(SacI)ATGGTTGCAGCAGCAGAAAT3
下游引物 5CCG CTCGAG(Xhol)TCAGAATGGGCCAGGAGTTC3
设计的引物上游有起始密码子,下游有终止密码子,那么最终表达的蛋白到底有多大呢?求大神指点
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weining1203

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by ypan at 2012-10-11 16:12:56
做SDS-PAGE大概的显示条带为90~100KDa.

在你的目的蛋白前面还有约170个氨基酸,包括Trx.TAG, S.TAG, His.TAG等蛋白序列。

核对pET-32a质粒图谱算出来。

谢谢
8楼2012-10-11 19:41:05
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
……你都说你目的蛋白78kd了,那你表达出来的应该就是78kd+HIS标签的大小.

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-10-09 15:13:15
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weining1203

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2012-10-09 15:13:15
……你都说你目的蛋白78kd了,那你表达出来的应该就是78kd+HIS标签的大小.

哦。。。 不太明白,加几个HIS,请说详细点,本人小白,谢谢您
3楼2012-10-09 15:42:44
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Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by weining1203 at 2012-10-09 15:42:44
哦。。。 不太明白,加几个HIS,请说详细点,本人小白,谢谢您...

加几个HIS取决于你用的载体.以6个His为例子,分子量是155*6=1KD

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
4楼2012-10-09 15:56:54
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