24小时热门版块排行榜    

查看: 2210  |  回复: 9
当前只显示满足指定条件的回帖,点击这里查看本话题的所有回帖

weining1203

新虫 (小有名气)

[求助] 关于pET-32a表达的一些问题

我的目的蛋白大概78Kd,使用pET-32a表达载体,酶切位点为sacI和Xhol,
上游引物 5G GAGCTC(SacI)ATGGTTGCAGCAGCAGAAAT3
下游引物 5CCG CTCGAG(Xhol)TCAGAATGGGCCAGGAGTTC3
设计的引物上游有起始密码子,下游有终止密码子,那么最终表达的蛋白到底有多大呢?求大神指点
回复此楼
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weining1203

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
6楼: Originally posted by ypan at 2012-10-11 16:12:56
做SDS-PAGE大概的显示条带为90~100KDa.

在你的目的蛋白前面还有约170个氨基酸,包括Trx.TAG, S.TAG, His.TAG等蛋白序列。

核对pET-32a质粒图谱算出来。

谢谢
8楼2012-10-11 19:41:05
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 10 个回答

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

感谢参与,应助指数 +1
……你都说你目的蛋白78kd了,那你表达出来的应该就是78kd+HIS标签的大小.

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
2楼2012-10-09 15:13:15
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weining1203

新虫 (小有名气)

送鲜花一朵
引用回帖:
2楼: Originally posted by Marado at 2012-10-09 15:13:15
……你都说你目的蛋白78kd了,那你表达出来的应该就是78kd+HIS标签的大小.

哦。。。 不太明白,加几个HIS,请说详细点,本人小白,谢谢您
3楼2012-10-09 15:42:44
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

Marado

金虫 (正式写手)

Dreamer

【答案】应助回帖

引用回帖:
3楼: Originally posted by weining1203 at 2012-10-09 15:42:44
哦。。。 不太明白,加几个HIS,请说详细点,本人小白,谢谢您...

加几个HIS取决于你用的载体.以6个His为例子,分子量是155*6=1KD

» 本帖已获得的红花(最新10朵)

Look,ifyouhadoneshot,oroneopportunity,toseizeeverythingyoueverwanted,inonemoment.Wouldyoucaptureit,orjustletitslip?
4楼2012-10-09 15:56:54
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 江苏省农科院招调剂1名 +4 Qwertyuop 2026-03-01 4/200 2026-03-02 14:27 by 升格阿达
[考研] 化工专硕348,一志愿985求调剂 +6 弗格个 2026-02-28 9/450 2026-03-02 14:09 by liyongv
[考研] 材料与化工328求调剂 +3 。,。,。,。i 2026-03-02 3/150 2026-03-02 13:09 by houyaoxu
[考研] 考研复试调剂,过国家线的同学都可报名 +3 黑!在干嘛 2026-02-28 4/200 2026-03-02 12:20 by 花鱼不是鱼
[考研] 265分求调剂不调专业和学校有行学上就 +6 礼堂丁真258 2026-02-28 9/450 2026-03-02 12:04 by 52hz~~
[考研] 求调剂 +3 熬夜的猫头鹰 2026-03-02 3/150 2026-03-02 11:45 by 刘兵
[考研] 0856材料与化工,270求调剂 +8 YXCT 2026-03-01 9/450 2026-03-02 11:01 by 无际的草原
[考研] 欢迎采矿、地质、岩土、计算机、人工智能等专业的同学报考 +5 pin8023 2026-02-28 7/350 2026-03-02 10:33 by ZY,先生
[考研] 0856材料调剂 +4 沿岸有贝壳OUC 2026-03-02 4/200 2026-03-02 10:19 by 公瑾逍遥
[考研] 材料复试调剂 +4 学材料的点 2026-03-01 5/250 2026-03-02 08:26 by houyaoxu
[基金申请] 本子写完了,给DS兄弟看了,得了92分 +3 Doma 2026-03-01 7/350 2026-03-02 00:00 by jnzsy
[硕博家园] 博士自荐 +7 科研狗111 2026-02-26 11/550 2026-03-01 22:24 by 哲平L
[考研] 0856材料求调剂 +11 hyf hyf hyf 2026-02-28 12/600 2026-03-01 18:57 by 18137688336
[考研] 328求调剂 +3 aaadim 2026-03-01 5/250 2026-03-01 17:29 by njzyff
[考研] 0856材料求调剂 +4 麻辣鱿鱼 2026-02-28 4/200 2026-03-01 16:51 by caszguilin
[考研] 313求调剂 +3 水流年lc 2026-02-28 3/150 2026-03-01 16:01 by 新能源达人
[考研] 307求调剂 +5 wyyyqx 2026-03-01 5/250 2026-03-01 15:21 by Fff-1
[考研] 304求调剂 +6 曼殊2266 2026-02-28 7/350 2026-03-01 15:14 by wjLi2017
[考研] 求调剂 +6 repeatt?t 2026-02-28 6/300 2026-03-01 14:37 by Sakura绘
[高分子] 求环氧树脂研发1名 +3 孙xc 2026-02-25 11/550 2026-02-28 16:57 by ichall
信息提示
请填处理意见