应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 微生物 » 实验/技术 » 细菌脂肪酶活性的测定
131/2返回列表12下一页
查看: 4267  |  回复: 12
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

秦川萝卜头

金虫 (小有名气)

[求助] 细菌脂肪酶活性的测定

大家好：我想在这跟大家讨论一下脂肪酶活性的测定方法。我是以聚乙烯醇橄榄油乳化液为底物，（2g聚乙烯醇，150ml水，加热溶解，加入50ml橄榄油。用组织搅拌机，匀浆两分钟）粗酶液，用的就是细菌的菌悬液！测定过程：取5ml PH=7.5的磷酸缓冲液5ml，分别到4个锥形瓶中！在40℃预热5min 加入2ml菌悬液，40℃保温15分钟，取出后，加入15ml95%乙醇做终止剂。其中两个空白以失活的酶加入！其他条件都一样！为什么我用0.05mol/L的OHNa滴定，发现消耗的碱量很少，且跟空白差不多！我不知道问题在哪？我的方法哪有不对吗？请各位指教。谢谢！
回复此楼

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
只要努力，总会有结果的
1楼 2012-01-07 10:53:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
感谢参与，应助指数 +1
rainwander(金币+1): 鼓励交流 2012-01-08 23:44:51
按你这样说就是酶没反应吧，你用菌悬液，怎么不破碎细胞呢，这个脂肪酶表达不一定是胞外分泌的，采用脂肪酶标准滴定法，应该采用的是粗酶液（细胞破碎液）。还有一种可能就是你的酶活性很低或没活性。
赞一下(1人) 回复此楼
人生百态原为海，看破红尘方为岸！
2楼2012-01-08 22:10:38
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秦川萝卜头

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2012-01-08 22:10:38:
按你这样说就是酶没反应吧，你用菌悬液，怎么不破碎细胞呢，这个脂肪酶表达不一定是胞外分泌的，采用脂肪酶标准滴定法，应该采用的是粗酶液（细胞破碎液）。还有一种可能就是你的酶活性很低或没活性。

您好，如果要破碎细胞，应该怎么做呢？我还想请教一下您，P-NPP法测脂肪酶活性应该怎么做！关键是我的P-NPP不溶，不知如何是好！恳请您的解答！谢谢！
赞一下 回复此楼
只要努力，总会有结果的
3楼2012-01-08 22:17:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinpeng_6118

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
zhang8826857(金币+1): 大力鼓励交流^_^ 2012-01-12 11:07:28
秦川萝卜头(金币+5): 2012-01-12 14:22:40
细胞破碎采用的是超声波破碎仪，要是没有细胞破碎仪的话，你可以采用反复冻融法破碎，后者的效果不是很好。或者采用溶菌酶也行。我们采用pNP系列底物测定酶活，采用紫外分光光度计动力学曲线连续扫描来测定酶促反应斜率。pNP底物采用乙腈溶解，配成10mM浓度就行，然后直接加到反应体系中就可以了。
赞一下(1人) 回复此楼
人生百态原为海，看破红尘方为岸！
4楼2012-01-09 15:54:52
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秦川萝卜头

金虫 (小有名气)
引用回帖:
楼: Originally posted by jinpeng_6118 at 2012-01-09 15:54:52:
细胞破碎采用的是超声波破碎仪，要是没有细胞破碎仪的话，你可以采用反复冻融法破碎，后者的效果不是很好。或者采用溶菌酶也行。我们采用pNP系列底物测定酶活，采用紫外分光光度计动力学曲线连续扫描来测定酶促反 ...

您好，因为我是学化学的，现在做的东西需要测一下酶活，您能不能给我一个具体的P-NP方法，小弟万分感激！我的邮箱：shenyinghui.520@163.com          谢谢！
赞一下 回复此楼
只要努力，总会有结果的
5楼2012-01-11 00:26:34
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sdfsf2000

新虫 (初入文坛)
我是测定公子小丑鱼消化道脂肪酶的，想求一个聚乙烯醇橄榄油乳化液的配法，跪求，好心人求回复我或发我邮箱sdfsf2000@163.com
赞一下 回复此楼
6楼2012-10-26 13:37:09
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

koalarola

新虫 (小有名气)
国标中测脂肪酶活力，空白是不加酶液，楼主可试一试空白不加灭活酶液。如果仍然测定值很低，可能说明酶液失活或者细胞没有完全破碎。
赞一下 回复此楼
7楼2012-10-30 17:06:55
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

_Jun

新虫 (初入文坛)
聚乙烯醇橄榄油乳化液均质速度是多少的 乳化后静置还会分层吗
赞一下 回复此楼
8楼2013-10-17 09:53:49
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

李庆张雪

新虫 (初入文坛)
亲，我用pnpb法在做蛙的消化道脂肪酶活力，可是结果一直不好，想改用聚乙烯醇橄榄油乳化液来测，请问乳化液怎么制作呀，还有有没有改进的pnpb法呀，跪求哈
赞一下 回复此楼
9楼2013-11-06 00:17:48
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

秦川萝卜头

金虫 (小有名气)
引用回帖:
9楼: Originally posted by 李庆张雪 at 2013-11-06 00:17:48
亲，我用pnpb法在做蛙的消化道脂肪酶活力，可是结果一直不好，想改用聚乙烯醇橄榄油乳化液来测，请问乳化液怎么制作呀，还有有没有改进的pnpb法呀，跪求哈

微生物实验书上就有橄榄油乳化法的具体操作，这个也有个国标，最好按国标来，Pnpb的改进法，不是太清楚
赞一下 回复此楼
只要努力，总会有结果的
10楼2013-11-06 22:34:28
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 秦川萝卜头 的主题更新
131/2返回列表12下一页
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 332求调剂 +5 Zz版 2026-03-13 5/250 2026-03-17 11:01 by JineShine
[考研] 268求调剂 +5 好运连绵不绝 2026-03-12 5/250 2026-03-17 10:12 by Sammy2
[论文投稿] 有没有大佬发小论文能带我个二作 +3 增锐漏人 2026-03-17 4/200 2026-03-17 09:26 by xs74101122
[考研] 东南大学364求调剂 +5 JasonYuiui 2026-03-15 5/250 2026-03-16 21:28 by 木瓜膏
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[考研] 321求调剂 +5 大米饭！ 2026-03-15 5/250 2026-03-16 16:33 by houyaoxu
[考研] 312求调剂 +3 陌宸希 2026-03-16 4/200 2026-03-16 15:06 by peike
[考研] 285求调剂 +6 ytter 2026-03-12 6/300 2026-03-16 15:05 by njzyff
[考研] 308求调剂 +3 是Lupa啊 2026-03-16 3/150 2026-03-16 10:07 by 求调剂zz
[考研] 求老师收留调剂 +4 jiang姜66 2026-03-14 5/250 2026-03-15 20:11 by Winj1e
[考研] 【0703化学调剂】-一志愿华中师范大学-六级475 +5 Becho359 2026-03-11 5/250 2026-03-14 11:35 by 哦哦123
[考研] 材料与化工（0856）304求B区调剂 +6 邱gl 2026-03-12 7/350 2026-03-13 23:24 by 邱gl
[考研] 308求调剂 +5 是Lupa啊 2026-03-11 5/250 2026-03-13 22:13 by JourneyLucky
[考研] 26调剂/材料科学与工程/总分295/求收留 +9 2026调剂侠 2026-03-12 9/450 2026-03-13 20:46 by 18595523086
[考研] 工科材料085601 279求调剂 +8 困于星晨 2026-03-12 10/500 2026-03-13 15:42 by ms629
[考研] 295求调剂 +3 小匕仔汁 2026-03-12 3/150 2026-03-13 15:17 by vgtyfty
[考研] 26考研求调剂 +5 丶宏Sir 2026-03-13 5/250 2026-03-13 13:05 by JourneyLucky
[考研] 070303一志愿西北大学学硕310找调剂 +3 d如愿上岸 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:43 by houyaoxu
[考研] 296求调剂 +3 大口吃饭 身体健 2026-03-13 3/150 2026-03-13 10:31 by 学员8dgXkO
[基金申请] 提交后的基金本子，已让学校撤回了，可否换口子提交 +3 dut_pfx 2026-03-10 3/150 2026-03-11 08:38 by kudofaye
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭