| 查看: 1618 | 回复: 4 | |||
[求助]
pfu扩增，菌液PCR问题
|
|
各位虫友，我想咨询一下关于PFU扩增后连接T载体的问题，以及菌液PCR鉴定阳性菌问题，希望大家能给与帮助和支持！谢谢！ 1，PFU扩增后连接T载体问题。我经常用TAKARA的PYROBEST扩增后，跑胶，回收，用DATP加A，纯化，连接T载体。请问这样做如何？将扩增后的产物回收后，用T4 Polynucleotide Kinase将产物磷酸化处理，再和去磷酸化处理的T载体（如pSIMPLE-18 EcoR V/BAP Vector）进行连接，转化，挑菌，菌液PCR鉴定阳性菌。请问这两种方法哪个效率较高？ 2，我经常遇到的问题是，加A 连接T载体后转化，能长很多菌斑，挑菌后做菌液PCR,阳性率很低很低，每次至少挑三四十管，甚至八九十管，运气好有2-3管阳性菌，运气差连一管阳性菌都没有！哎！很郁闷，我的片段有1900左右，用美莱博的PCR MIX。 请问我该怎么做才能使阳性率高？谢谢！ |
回复此楼» 猜你喜欢
湖北师范大学招调剂啦
已经有9人回复
-
邵阳学院食品与化学工程学院硕士调剂
已经有0人回复
-
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费?
已经有70人回复
-
天津商业大学 生物与医药课题组招生
已经有0人回复
-
生物化工学硕招收调剂
已经有0人回复
-
广东石油化工学院2026年硕士研究生需要多名生物，制药工程，食品专业的调剂生
已经有0人回复
-
化工申博
已经有3人回复
-
申博自荐
已经有2人回复
-
广西民族大学化学化工学院化学工程与技术学硕，材料化工专硕调剂名额充足！
已经有0人回复
» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
- 放线菌PCR扩增的条件与扩增样品的量
已经有4人回复
- 菌液PCR是阳性，却提不出来阳性质粒！求助
已经有31人回复
- 求帮忙分析下菌液PCR检测结果
已经有19人回复
- 自己做的PFU高保真酶PCR，胶图如下，没有目的条带？
已经有17人回复
- 菌液PCR验证又失败了
已经有15人回复
- 菌液PCR验证
已经有8人回复
- 做一个克隆所需的最短时间？比比谁更高效快速！
已经有39人回复
- 两个基因融合不起来
已经有13人回复
- 胶回收产物连接转化后菌液PCR电泳条带出现问题
已经有8人回复
- 【求助/交流】PCR求助
已经有13人回复
- 【求助/交流】有关克隆方面的问题
已经有4人回复
- 【求助/交流】菌落PCR求助
已经有23人回复
- 【求助/交流】关于pfu酶PCR
已经有8人回复
- 【求助/交流】有关菌液PCR的问题
已经有14人回复
- 【求助/交流】5500bp的片段PCR问题
已经有21人回复
2楼2011-12-30 00:22:42
3楼2011-12-31 11:57:14
cdl007
木虫 (正式写手)
- MolEPI: 41
- 应助: 46 (小学生)
- 贵宾: 0.025
- 金币: 2570.6
- 红花: 11
- 帖子: 545
- 在线: 123.1小时
- 虫号: 275133
- 注册: 2006-08-27
- 专业: 肿瘤病因
4楼2012-01-01 07:19:43
yuguiyan
至尊木虫 (文坛精英)
- 应助: 277 (大学生)
- 金币: 15912.3
- 散金: 451
- 红花: 78
- 沙发: 433
- 帖子: 21986
- 在线: 2078.9小时
- 虫号: 2029722
- 注册: 2012-09-25
- 专业: 原子和分子物理
5楼2012-10-21 19:21:34
