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北京石油化工学院2026年研究生招生接收调剂公告

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angelee

新虫 (初入文坛)

应助: 0 (幼儿园)
帖子: 3
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[求助] 求助！大片段4kb左右基因PCR克隆方法已有2人参与

求助！大片段4kb左右基因PCR克隆方法。之前，设计引物以cDNA为模板扩增，结果没有任何条带，究竟是为什么呢？求解答~

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1楼 2011-12-09 21:45:08

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世外清风

铁杆木虫 (职业作家)

BioEPI: 1
应助: 63 (初中生)
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性别: GG
专业: 动物遗传学

【答案】应助回帖

感谢参与，应助指数 +1

基因组DNA扩过没问题，takara的LA可以，可以尝试下两步法试试

6楼2011-12-10 16:53:41

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shaquila

金虫 (正式写手)

BioEPI: 2
应助: 37 (小学生)
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虫号: 654839
注册: 2008-11-15
专业: 生物大分子结构与功能

【答案】应助回帖

大片段的反转是个问题哦

2楼2011-12-10 07:49:21

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zhaoyonggang

银虫 (小有名气)

应助: 5 (幼儿园)
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专业: 细胞信号转导

【答案】应助回帖

★ ★
lstt09nk(金币+2): 鼓励交流 2011-12-10 10:56:18

先看看引物设计问题，Tm是不是太低了，有没有引物二聚体。

如果引物设计没有问题的话，看看cDNA序列中有没有高GC含量的片段等difficult 序列。有得话，试试two-step PCR，或者加点DMSO或甜菜碱。去网上google一下吧，会有有用的信息的。

4Kb不算太大，应该是没问题的。

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3楼2011-12-10 10:03:06

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cxl_yll

木虫 (正式写手)

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专业: 抗肿瘤药物药理

【答案】应助回帖

★
lstt09nk(金币+1): 9000哦，很厉害哦 2011-12-10 10:56:37

用takara的la taq酶，我9000都出来了，不过概率很小

赞一下(1人)

4楼2011-12-10 10:34:26

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

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