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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助！大片段4kb左右基因PCR克隆方法
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angelee

新虫 (初入文坛)

[求助] 求助！大片段4kb左右基因PCR克隆方法 已有2人参与

求助！大片段4kb左右基因PCR克隆方法。之前，设计引物以cDNA为模板扩增，结果没有任何条带，究竟是为什么呢？求解答~
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1楼 2011-12-09 21:45:08
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cxl_yll

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★
lstt09nk(金币+1): 9000哦，很厉害哦 2011-12-10 10:56:37
用takara的la taq酶，我9000都出来了，不过概率很小
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4楼2011-12-10 10:34:26
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cxl_yll

木虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

引用回帖:
10楼: Originally posted by mimi糖砣 at 2014-07-10 14:08:04
想请教一下，我最近想克隆七八千左右的，用cDNA克隆，请问能不能指点一些细节，比如反转录什么酶比较好，有没有检测cDNA的质量，引物设计需要注意什么，有没有分段克隆的经验？问题比较多，非常感谢分享~...

我用的LA tag预混装的，P了1个月，就P出5次，你可能需要换一种方法，基本做一次PCR需要10个小时吧，3年前做的细节忘记的差不多了，我给你回信了...
分段克隆需要找到合适的酶切位点吧，一般好的酶切位点都没占用了，还有链接的时候有时候需要看一下方向...
赞一下(1人) 回复此楼
11楼2014-07-11 10:03:43
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