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小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 请教western blot 时蛋白稀释液情况
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heqin-1985

银虫 (小有名气)

[交流] 请教western blot 时蛋白稀释液情况

以前没有做WB，最近做了两个星期了，上一周用三蒸水稀释了一下蛋白使六个样品等蛋白，然后上的样，但一周做了基本没有结果，显影基本就是空白的片子，就一两个有条带，但不好。请教是不能用水稀释的原因吗，有人说要用蛋白裂解液稀释是吗，可以用PBS稀释吗？
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1楼 2011-11-14 19:55:02
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mayina

铜虫 (初入文坛)
★
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heqin-1985(金币+1): 2011-11-18 21:45:50
用水稀释是可以的 是不是后边的步骤有问题？没显影原因很多的
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3楼2011-11-17 19:15:13
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lxy19870124

铁虫 (初入文坛)
★
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heqin-1985(金币+1): 2011-11-18 21:45:54
上样缓冲液稀释也行。
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2楼2011-11-17 10:56:41
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mayina

铜虫 (初入文坛)
heqin-1985(金币+1): 2011-11-18 21:45:40
补充下 有人说用TBST补齐也可以 我还没试过 尝试过再来回帖哈~
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4楼2011-11-17 19:16:06
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2011加油

银虫 (正式写手)
★
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heqin-1985(金币+2): 2011-11-18 21:45:35
呵呵，显影无结果，还有只是一两个条带，我建议你可以先跑一次胶后，看看考染的情况，观察你的目的蛋白和内参是否在胶上都有。如果观察到说明你的蛋白样品没问题，可以接着往下做。但后面转膜、孵育、显影等环节遇到的问题也很多，你可以摸索一下。

另外，你说的蛋白稀释成等浓度问题。我是先计算好蛋白上样量，由于各组蛋白浓度不一，可以采用TBST溶液来补齐各组的体积，再加5乘的loading buffer，最终加热变性，就行了。
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5楼2011-11-17 19:34:52
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