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heqin-1985

银虫 (小有名气)

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[交流] 请教western blot 时蛋白稀释液情况

以前没有做WB，最近做了两个星期了，上一周用三蒸水稀释了一下蛋白使六个样品等蛋白，然后上的样，但一周做了基本没有结果，显影基本就是空白的片子，就一两个有条带，但不好。请教是不能用水稀释的原因吗，有人说要用蛋白裂解液稀释是吗，可以用PBS稀释吗？

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1楼 2011-11-14 19:55:02

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

2011加油

银虫 (正式写手)

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heqin-1985(金币+2): 2011-11-18 21:45:35

呵呵，显影无结果，还有只是一两个条带，我建议你可以先跑一次胶后，看看考染的情况，观察你的目的蛋白和内参是否在胶上都有。如果观察到说明你的蛋白样品没问题，可以接着往下做。但后面转膜、孵育、显影等环节遇到的问题也很多，你可以摸索一下。

另外，你说的蛋白稀释成等浓度问题。我是先计算好蛋白上样量，由于各组蛋白浓度不一，可以采用TBST溶液来补齐各组的体积，再加5乘的loading buffer，最终加热变性，就行了。