24小时热门版块排行榜

返回列表

当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

heqin-1985

银虫 (小有名气)

应助: 0 (幼儿园)
金币: 485.6
帖子: 271
在线: 46.2小时
虫号: 854039

[交流] 请教western blot 时蛋白稀释液情况

以前没有做WB，最近做了两个星期了，上一周用三蒸水稀释了一下蛋白使六个样品等蛋白，然后上的样，但一周做了基本没有结果，显影基本就是空白的片子，就一两个有条带，但不好。请教是不能用水稀释的原因吗，有人说要用蛋白裂解液稀释是吗，可以用PBS稀释吗？

回复此楼

» 猜你喜欢

为什么蛋白质氨基酸测定大家都测17种? 已经有5人回复
《灰分记：我与坩埚的“灰烬”之恋》已经有3人回复
化学工程及工业化学论文润色/翻译怎么收费? 已经有271人回复
求助食品检验工（基础知识），中国劳动社会出版社电子版已经有5人回复
胶体几丁质的结晶度？已经有0人回复
诚挚招收全日制博士！！！中国农业科学院麻类研究所谭志坚研究员课题组招收博士已经有2人回复
三甲基羟乙基丙二胺的合成路线已经有5人回复

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

关于western blot的小问题已经有12人回复
弱弱的问一句：原核表达 &Western blot 已经有6人回复
western blot中蛋白质转印问题已经有17人回复
Western Blot实验的蛋白条带都连在一起已经有37人回复
western blot 请教已经有10人回复
Western blot 检测胱氨酸谷氨酸转运体蛋白表达已经有6人回复
Western Blot电泳蛋白质外漏问题求助已经有22人回复
【求助/交流】请教大分子量蛋白western blot转膜的一些问题已经有10人回复
【求助/交流】纯化酶切后的膜蛋白做Western blot没条带，why？已经有9人回复
western blot 半干转膜后，发现条带个别缺失，不知道什么原因，请教各位已经有1人回复
【求助/交流】请教Western blot出现非特异性条带的怎么解决已经有8人回复
【求助/交流】western blot中，蛋白经SDSPAGE后不是变性了吗，怎么还能和一抗结合？已经有13人回复
【求助/交流】western blot抗体稀释液中叠氮钠的含量已经有5人回复
Western Blot 磷酸化蛋白测定问题已经有9人回复

» 抢金币啦！回帖就可以得到:
查看全部散金贴

1楼2011-11-14 19:55:02

已阅回复此楼关注TA 给TA发消息送TA红花 TA的回帖

2011加油

银虫 (正式写手)

MolEPI: 1
应助: 9 (幼儿园)
金币: 722.8
帖子: 382
在线: 177.9小时
虫号: 1210848

★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
heqin-1985(金币+2): 2011-11-18 21:45:35

呵呵，显影无结果，还有只是一两个条带，我建议你可以先跑一次胶后，看看考染的情况，观察你的目的蛋白和内参是否在胶上都有。如果观察到说明你的蛋白样品没问题，可以接着往下做。但后面转膜、孵育、显影等环节遇到的问题也很多，你可以摸索一下。

另外，你说的蛋白稀释成等浓度问题。我是先计算好蛋白上样量，由于各组蛋白浓度不一，可以采用TBST溶液来补齐各组的体积，再加5乘的loading buffer，最终加热变性，就行了。

赞一下(1人)