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heqin-1985

银虫 (小有名气)


[交流] 请教western blot 时蛋白稀释液情况

以前没有做WB,最近做了两个星期了,上一周用三蒸水稀释了一下蛋白使六个样品等蛋白,然后上的样,但一周做了基本没有结果,显影基本就是空白的片子,就一两个有条带,但不好。请教是不能用水稀释的原因吗,有人说要用蛋白裂解液稀释是吗,可以用PBS稀释吗?
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mayina

铜虫 (初入文坛)


heqin-1985(金币+1): 2011-11-18 21:45:40
补充下 有人说用TBST补齐也可以 我还没试过 尝试过再来回帖哈~
4楼2011-11-17 19:16:06
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lxy19870124

铁虫 (初入文坛)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
heqin-1985(金币+1): 2011-11-18 21:45:54
上样缓冲液稀释也行。
2楼2011-11-17 10:56:41
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mayina

铜虫 (初入文坛)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
heqin-1985(金币+1): 2011-11-18 21:45:50
用水稀释是可以的 是不是后边的步骤有问题?没显影原因很多的
3楼2011-11-17 19:15:13
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2011加油

银虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
heqin-1985(金币+2): 2011-11-18 21:45:35
呵呵,显影无结果,还有只是一两个条带,我建议你可以先跑一次胶后,看看考染的情况,观察你的目的蛋白和内参是否在胶上都有。如果观察到说明你的蛋白样品没问题,可以接着往下做。但后面转膜、孵育、显影等环节遇到的问题也很多,你可以摸索一下。

另外,你说的蛋白稀释成等浓度问题。我是先计算好蛋白上样量,由于各组蛋白浓度不一,可以采用TBST溶液来补齐各组的体积,再加5乘的loading buffer,最终加热变性,就行了。
5楼2011-11-17 19:34:52
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