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BIO-che

新虫 (小有名气)

[求助] 酶的纯化问题

在下,目前正在纯化一个酸性酶,用离子交换层析去纯化,结果发现纯化出来的结果,跑电泳出现了6-7条带,并且靠得很近,这样下一步,很难处理,老师想让我用纯化后的蛋白质再去让同一根离子柱,该怎么办??各位大侠帮忙一下!!!
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电泳、bio-rad 电转化仪及操作 【分子生物】EPI帖

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BIO-che

新虫 (小有名气)

非常感谢你们的回复,我以前做过小体积实验,来测不同PH对阴离子柱的吸附作用的影响,在PH 4.0时阴离子柱可以较大地吸附目标酶,但是对酶活会有少量的损伤(对比于5.0 ) 其实PH5-8的4个梯度对阴离子的吸附量的影响是基本相近的。因此,我断定淀粉酶的等电点小于4.0  同时我的淀粉酶是真菌的淀粉酶,我也在想是不是它有可能存在亚基,因此论文上的淀粉酶的分子量大概在60KD左右,而我的竞只有不到40KD,同时有2条带靠得很近,小于30KD。十分吃惊。对于亚基我当时有怀疑过,只是论文上这方面的描述很少,不敢轻下结论!!
8楼2011-11-09 21:15:48
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江南

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励积极应助! 2011-11-05 15:08:21
问题说的不大清楚:是用的阴离子交换层析还是阳离子交换层析?缓冲液是什么?pH是多少? 可以按老师说的做一下,或者改变pH条件试一下,有条件的话可以把这7条带质谱鉴定一下……
2楼2011-11-05 00:40:01
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BIO-che

新虫 (小有名气)

是用阴离子柱,PH 5.0 用醋酸缓冲液,但是已经用阴离子柱纯化后的蛋白质 去变化缓冲液的PH,再去上同一根柱子会有效果吗?
3楼2011-11-05 12:10:01
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good!高手出手了! 2011-11-06 00:05:08
不会再有更纯的效果的,除非把你上次的收集管分开,比如1-10都有酶活力,如果把1和10合并再上,那么就有效果,但不一定会比酶活力最高的3(打比方)更加纯。如果把1-10合并再上,无效果。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2011-11-05 22:56:04
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