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BIO-che

新虫 (小有名气)

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[求助] 酶的纯化问题

在下，目前正在纯化一个酸性酶，用离子交换层析去纯化，结果发现纯化出来的结果，跑电泳出现了6-7条带，并且靠得很近，这样下一步，很难处理，老师想让我用纯化后的蛋白质再去让同一根离子柱，该怎么办？？各位大侠帮忙一下！！！

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1楼 2011-11-05 00:02:30

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BIO-che

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非常感谢你们的回复，我以前做过小体积实验，来测不同PH对阴离子柱的吸附作用的影响，在PH 4.0时阴离子柱可以较大地吸附目标酶，但是对酶活会有少量的损伤（对比于5.0 ）其实PH5-8的4个梯度对阴离子的吸附量的影响是基本相近的。因此，我断定淀粉酶的等电点小于4.0 同时我的淀粉酶是真菌的淀粉酶，我也在想是不是它有可能存在亚基，因此论文上的淀粉酶的分子量大概在60KD左右，而我的竞只有不到40KD，同时有2条带靠得很近，小于30KD。十分吃惊。对于亚基我当时有怀疑过，只是论文上这方面的描述很少，不敢轻下结论！！