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BIO-che

新虫 (小有名气)

[求助] 酶的纯化问题

在下,目前正在纯化一个酸性酶,用离子交换层析去纯化,结果发现纯化出来的结果,跑电泳出现了6-7条带,并且靠得很近,这样下一步,很难处理,老师想让我用纯化后的蛋白质再去让同一根离子柱,该怎么办??各位大侠帮忙一下!!!
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电泳、bio-rad 电转化仪及操作 【分子生物】EPI帖

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BIO-che

新虫 (小有名气)

是用阴离子柱,PH 5.0 用醋酸缓冲液,但是已经用阴离子柱纯化后的蛋白质 去变化缓冲液的PH,再去上同一根柱子会有效果吗?
3楼2011-11-05 12:10:01
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江南

金虫 (正式写手)

【答案】应助回帖

★ ★
amisking(金币+2): 鼓励积极应助! 2011-11-05 15:08:21
问题说的不大清楚:是用的阴离子交换层析还是阳离子交换层析?缓冲液是什么?pH是多少? 可以按老师说的做一下,或者改变pH条件试一下,有条件的话可以把这7条带质谱鉴定一下……
2楼2011-11-05 00:40:01
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冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good!高手出手了! 2011-11-06 00:05:08
不会再有更纯的效果的,除非把你上次的收集管分开,比如1-10都有酶活力,如果把1和10合并再上,那么就有效果,但不一定会比酶活力最高的3(打比方)更加纯。如果把1-10合并再上,无效果。
流星来时我许了个愿,愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具,久不看论坛一来就提问者,宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2011-11-05 22:56:04
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BIO-che

新虫 (小有名气)

我的电泳图是在有酶的洗脱峰的酶活最大值的4管,进行电泳,结果是6条带,其中有三条靠得很近。这里可能是G75也分不开。那怎么办?这的实验室就是只有离子交换层析和G75了!!!
5楼2011-11-06 23:55:51
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