应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » 酶的纯化问题
31/1返回列表
查看: 2211  |  回复: 8
查看全部回帖 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 MolEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

BIO-che

新虫 (小有名气)

[求助] 酶的纯化问题

在下，目前正在纯化一个酸性酶，用离子交换层析去纯化，结果发现纯化出来的结果，跑电泳出现了6-7条带，并且靠得很近，这样下一步，很难处理，老师想让我用纯化后的蛋白质再去让同一根离子柱，该怎么办？？各位大侠帮忙一下！！！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

电泳、bio-rad 电转化仪及操作 【分子生物】EPI帖

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-11-05 00:02:30
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶
★ ★ ★ ★
西瓜(金币+4): Good！高手出手了！ 2011-11-06 00:05:08
不会再有更纯的效果的，除非把你上次的收集管分开，比如1-10都有酶活力，如果把1和10合并再上，那么就有效果，但不一定会比酶活力最高的3（打比方）更加纯。如果把1-10合并再上，无效果。
赞一下(1人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
4楼2011-11-05 22:56:04
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

冼亮淀粉酶

专家顾问 (知名作家)

生物大分子降解酶

【答案】应助回帖

mengfei8336(MolEPI+1): 2011-11-09 20:11:17
BIO-che(金币+1): 98分 是个高手 可以看出来 很喜欢你 2011-11-13 00:09:21
引用回帖:
4楼: Originally posted by 冼亮淀粉酶 at 2011-11-05 22:56:04:
不会再有更纯的效果的，除非把你上次的收集管分开，比如1-10都有酶活力，如果把1和10合并再上，那么就有效果，但不一定会比酶活力最高的3（打比方）更加纯。如果把1-10合并再上，无效果。

刚看了楼主的站内短信，特回复如下：

1、关于淀粉酶有多少个亚基的问题，就目前文献报道，我印象中没有看到为多亚基四级结构的alpha-淀粉酶和糖化酶，其它淀粉酶是否为仅有三级结构我就不知道了。

2、楼主用阴离子交换层析，pH5.0的缓冲系统，阴离子交换层析要求使用的pH系统起码比目的蛋白质高1个pH值单位，也就是说此时淀粉酶的等电点小于或者等于4。就未知的淀粉酶来说，在不纯的情况下等电点确定起来存在误差，而小于4的淀粉酶比较少见，我怀疑可能目的蛋白质的等电点高于4.0，pH5.0的体系不一定合适，如果真的如此，则会造成洗脱行为不稳定。加上醋酸-醋酸钠缓冲液不是很稳定的缓冲体系，缓冲区间很窄。如果可以，建议使用6.0，换用其它缓冲体系。

3、关于分子筛，G75的分离范围适用于不超过100KD的蛋白质，要求目的蛋白质与杂质蛋白质分子量为2倍关系，或者相差更大。加上分子筛也不是能将两个蛋白质完全分开的，一个蛋白质的持续出峰时间会较长，造成相互污染。由于你的蛋白质杂带较多，所以我对分离效果不持乐观态度。

4、除了改变体系的pH值之外，还有更好的可能值得尝试，用疏水层析柱。换一种分离原理可能会提高分离效果。假如你们没有纯化仪，那就买空柱和填料自己装一根，不会很贵的。买的时候注意买使用范围广的苯基Phenyl。仅用强阴离子交换层析和凝胶过滤就能使蛋白质纯化，我认为需要很大的运气。

5、纯化之后要跑SDS-PAGE才能判断，下次要上图。
赞一下(2人) 回复此楼
流星来时我许了个愿，愿我有吃有喝还有舒服的猪圈。讨厌发帖前不搜索论坛重复发帖和仅把论坛当解决问题工具，久不看论坛一来就提问者，宁弃EPI和VIP也不回帖。
7楼2011-11-09 20:04:22
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
相关版块跳转 我要订阅楼主 BIO-che 的主题更新
31/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[找工作] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O.5.4,科目全,可+急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:21 by mibUvS8DDCwf
[教师之家] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.54,科目全,可伽急 +3 6F5UbRU2I5hL 2026-09-14 3/150 2026-09-15 00:12 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI一区T0P文章，我:8O.55.1.O.5.4,科目齐全,可+急 +4 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 5/250 2026-09-14 23:57 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 23:45 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.551.O.5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-14 23:21 by vZfe6xYu34yj
[教师之家] 售SCI一区文章，我:8.O.55.1.O.54,科目齐全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 3/150 2026-09-14 23:09 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:45 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI-T0P文章，我:8O.5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 6/300 2026-09-14 22:37 by vZfe6xYu34yj
[硕博家园] 售一区SCI文章T0P，我:8O.551.O54,科目全,可十急 +3 LwdutQ8HoqWP 2026-09-13 3/150 2026-09-14 22:24 by vZfe6xYu34yj
[找工作] 售SCI一区文章，我:8O5.5.1.O5.4,科目全,可伽急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:13 by vZfe6xYu34yj
[博后之家] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:12 by vZfe6xYu34yj
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 5/250 2026-09-14 22:00 by vZfe6xYu34yj
[考博] 售SCI文章，我:8O5.5.1.O.54,科目齐全,可+急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 5/250 2026-09-14 21:36 by vZfe6xYu34yj
[公派出国] 售SCI一区T0P文章，我:8.O55.1.O.54,科目全,可十急 +5 QUjhNVAcOSff 2026-09-13 7/350 2026-09-14 21:21 by vZfe6xYu34yj
[考博] 上海工程技术大学激光智能制造课题组招收博士研究生 +4 两三岁ss 2026-09-14 4/200 2026-09-14 20:29 by 班主任的同桌
[考研] 售SCI一区T0P文章，我:8.O.55.1.O54,科目全,可伽急 +3 s3fFTmArrBt6 2026-09-14 3/150 2026-09-14 18:01 by Aj1rhIDL5ixY
[考博] 售SCI文章，我:8O.5.5.1O.54,科目全,可十急 +4 3n8v2C8RimXI 2026-09-13 4/200 2026-09-14 15:37 by Aj1rhIDL5ixY
[找工作] 浙江师范大学是怎么坑我的 +6 recruit123 2026-09-09 6/300 2026-09-14 12:00 by 萨仁其其格
[考博] 西北工业大学材料学院电化学传感与催化课题组招收2027年推免研究生、博士生、博士后 +3 马方园 2026-09-10 4/200 2026-09-14 09:29 by Chem张zz
[教师之家] 浙江师范大学是怎么坑我的 +10 recruit123 2026-09-09 15/750 2026-09-13 10:45 by seaskyy
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭