应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 分子生物 » 综合其他 » PCR扩增问题
221/1返回列表
查看: 3638  |  回复: 21
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看

一凡8665

金虫 (小有名气)

[交流] PCR扩增问题

Sample Text
Sample Text
大家好!我初次做PCR扩增一个细菌的16Sr DNA，引物和扩增条件都是按照文献来的，但是奇怪的是PCR结束后电泳发现，引物和模板没有结合，这是什么原因呢？谢谢大家的释疑！
回复此楼

» 收录本帖的淘帖专辑推荐

PCR技术 分子生物学实验技术

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:
1楼 2011-11-03 20:31:41
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

yesucao

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
一凡8665(金币+1): 2011-11-04 09:14:00
一凡8665(金币+4): 2011-11-16 16:51:44
可能的原因：细菌DNA的提取过程中，存在较多的蛋白没有去除干净；加样过程中个人的操作；Taq酶失活，扩增的条件也可是适当的优化一下。分析的原因不多，见谅！！
赞一下(1人) 回复此楼
2楼2011-11-03 20:51:14
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

zhfge

铜虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
好吧，你检测过模板么？
赞一下(1人) 回复此楼
3楼2011-11-03 23:22:23
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

张建荣

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
一凡8665(金币+1): 2011-11-04 09:14:06
一凡8665(金币+1): 2011-11-16 16:51:59
模板和引物没有结合原因很多，但主要的原因是退火温度有点高，使模板和引物没有没有配对，做实验时有时看着经典步骤做了，还是不出结果，这就关键里面还有一个自己的摸索过程，那点自己摸索出来的东西作者一般是不会分享的，
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-11-04 00:39:11
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

longrna

新虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+3): 问得好哦~欢迎新虫参与交流！ 2011-11-04 23:52:28
非常奇怪LZ怎么看得出是模板与引物没有结合的呢？

会不会是PCR本身的问题？是否有做阳性及阴性对照。
赞一下(2人) 回复此楼
6楼2011-11-04 09:41:00
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

wjgang728

铁杆木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
你怎么确定引物和模板没有结合呢？基于什么来确定的？
赞一下(1人) 回复此楼
7楼2011-11-04 09:53:02
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

sunjump

至尊木虫 (知名作家)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
同样关注这类问题
赞一下(1人) 回复此楼
8楼2011-11-04 10:03:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

hxw321

银虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
一凡8665(金币+3): 2011-11-16 16:52:13
根据Tm值，做一个温度梯度看看。另外，不同的引物设计软件可能Tm值不一样，还是自己设计的好。
赞一下(1人) 回复此楼
9楼2011-11-04 10:40:06
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

imyting

至尊木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): Good！ 2011-11-04 23:53:00
P不出来的原因太复杂了，不同的人做，条件一样可能都做不出来，这种事情还是自己摸索的好。大家的意见只能是参考，毕竟自己的事只有自己最清楚^^我也经常遇到这种情况啊
赞一下(2人) 回复此楼
10楼2011-11-04 12:07:39
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一凡8665

金虫 (小有名气)
引用回帖:
3楼: Originally posted by zhfge at 2011-11-03 23:22:23:
好吧，你检测过模板么？

你好！检测过，不过有点断裂，情况不严重。
赞一下 回复此楼
11楼2011-11-04 13:12:50
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一凡8665

金虫 (小有名气)
引用回帖:
7楼: Originally posted by wjgang728 at 2011-11-04 09:53:02:
你怎么确定引物和模板没有结合呢？基于什么来确定的？

你好！因为PCR后跑胶发现除了marker外的亮带都在最前面。
赞一下 回复此楼
12楼2011-11-04 13:14:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一凡8665

金虫 (小有名气)
引用回帖:
6楼: Originally posted by longrna at 2011-11-04 09:41:00:
非常奇怪LZ怎么看得出是模板与引物没有结合的呢？

会不会是PCR本身的问题？是否有做阳性及阴性对照。

没做对照。
回复此楼
13楼2011-11-04 13:15:16
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

一凡8665

金虫 (小有名气)
引用回帖:
10楼: Originally posted by imyting at 2011-11-04 12:07:39:
P不出来的原因太复杂了，不同的人做，条件一样可能都做不出来，这种事情还是自己摸索的好。大家的意见只能是参考，毕竟自己的事只有自己最清楚^^我也经常遇到这种情况啊

谢谢！
回复此楼
14楼2011-11-04 13:15:56
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

江苏虞游

木虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
把反应参数发过来，帮你看看
赞一下(1人) 回复此楼
16楼2011-11-04 13:47:37
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

晕倒狸

金虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
学术讨论着啊！！
回复此楼
17楼2011-11-04 13:49:42
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

weixinsu123

铜虫 (正式写手)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
引用回帖:
10楼: Originally posted by imyting at 2011-11-04 12:07:39:
P不出来的原因太复杂了，不同的人做，条件一样可能都做不出来，这种事情还是自己摸索的好。大家的意见只能是参考，毕竟自己的事只有自己最清楚^^我也经常遇到这种情况啊

同意楼上的观点，你的PCR没结果出来，不见得就是引物和模板没有结合，况且这一步也看不出来。。。
赞一下(1人) 回复此楼
18楼2011-11-04 20:43:31
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

dragoner

新虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
估计还是引物设计的问题
赞一下(1人) 回复此楼
19楼2011-11-05 01:39:36
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

lixiangke

金虫 (小有名气)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
设立阴性对照，在优化PCR条件……
赞一下(1人) 回复此楼
20楼2011-11-05 09:08:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

jinpeng_6118

木虫 (正式写手)
★ ★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
西瓜(金币+1): 欢迎交流 2011-11-05 23:52:05
一凡8665(金币+4): 2011-11-16 16:52:42
DNA模板加的量要控制好，最好把模板稀释100-1000倍，另外退火温度掌握好，
赞一下(2人) 回复此楼
21楼2011-11-05 09:43:18
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

congcongyrl

铁虫 (初入文坛)
★
小木虫(金币+0.5):给个红包，谢谢回帖
一凡8665(金币+1): 2011-11-16 16:52:48
问题本身有点模糊。引物和模板没有结合？如何判断？是因为没有扩增产物？那样的原因太多了啊。
赞一下(1人) 回复此楼
22楼2011-11-05 20:49:51
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
简单回复
zhouenlai5555楼
2011-11-04 01:11   回复  
sunye15楼
2011-11-04 13:39   回复  
相关版块跳转 我要订阅楼主 一凡8665 的主题更新
221/1返回列表
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[基金申请] 号外号外 +5 GZUZM 2026-08-24 5/250 2026-08-24 18:34 by 40862026
[基金申请] 没有任何消息-是不是就凉了 +6 图啦图啦 2026-08-24 6/300 2026-08-24 17:44 by 小小红帆
[基金申请] 2026国自然函评费到账 +17 羊腰板 2026-08-21 19/950 2026-08-24 16:52 by iaeyuan
[基金申请] 估计是周四 +4 archvillain 2026-08-18 4/200 2026-08-24 13:53 by zzuzxg
[基金申请] 范进中举一文的中心思想 +6 炎黄贵胄 2026-08-22 7/350 2026-08-24 11:58 by 6543yes
[基金申请] 朋友圈看到的 +7 wangzilk 2026-08-18 9/450 2026-08-24 10:50 by cmrandy
[基金申请] 让我中一个面上吧！ +13 大萍1987 2026-08-20 16/800 2026-08-24 10:23 by 太傻了
[基金申请] 放榜前的不淡定 20+4 snowwithsea 2026-08-19 17/850 2026-08-24 10:20 by echo8914667
[基金申请] 科研孤儿太难了 +18 我4大白菜 2026-08-20 19/950 2026-08-24 09:47 by 凯恩广盛催化分�
[基金申请] 明天应该可查了！？ +4 chengyan1220 2026-08-23 4/200 2026-08-24 08:47 by gloomy6159
[基金申请] 什么时候开奖？ +10 CrisMessi 2026-08-18 11/550 2026-08-24 06:50 by 开心的小狮子
[教师之家] 跳槽后在研项目怎么办？ +5 简单化xn 2026-08-22 10/500 2026-08-23 12:38 by 简单化xn
[基金申请] 今天放榜吗？ +15 布布和一二 2026-08-19 16/800 2026-08-23 09:55 by 张春生
[基金申请] 只有每年这种时候来逛逛小木虫 +24 yaoyewhu2008 2026-08-20 26/1300 2026-08-22 17:43 by kammury
[基金申请] 时间戳今天，20号变了 +5 archvillain 2026-08-20 5/250 2026-08-22 06:12 by hui_daxiao
[基金申请] 时间戳又变了 +13 wuchongjun 2026-08-20 19/950 2026-08-21 17:21 by 紫杉醇
[基金申请] 应该是下周三26日公布了吧？ +4 哈哈蛤？ 2026-08-21 4/200 2026-08-21 10:58 by Vivilian
[基金申请] 重要消息，中午系统在维护 +11 yuleib84 2026-08-18 12/600 2026-08-20 11:09 by xskun
[基金申请] 明天放榜？ +5 Shxjjxjkx 2026-08-18 5/250 2026-08-18 18:14 by -大大大大大-
[基金申请] 今天维护系统维护 祝所有人 高中 +8 gjjjzhong 2026-08-18 9/450 2026-08-18 13:01 by 家与远方
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭