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一凡8665

金虫 (小有名气)


[交流] PCR扩增问题

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大家好!我初次做PCR扩增一个细菌的16Sr DNA,引物和扩增条件都是按照文献来的,但是奇怪的是PCR结束后电泳发现,引物和模板没有结合,这是什么原因呢?谢谢大家的释疑!
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江苏虞游

木虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
把反应参数发过来,帮你看看
16楼2011-11-04 13:47:37
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查看全部 22 个回答

yesucao

木虫 (正式写手)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
一凡8665(金币+1): 2011-11-04 09:14:00
一凡8665(金币+4): 2011-11-16 16:51:44
可能的原因:细菌DNA的提取过程中,存在较多的蛋白没有去除干净;加样过程中个人的操作;Taq酶失活,扩增的条件也可是适当的优化一下。分析的原因不多,见谅!!
2楼2011-11-03 20:51:14
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zhfge

铜虫 (初入文坛)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
好吧,你检测过模板么?
3楼2011-11-03 23:22:23
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张建荣

银虫 (小有名气)



小木虫(金币+0.5):给个红包,谢谢回帖
一凡8665(金币+1): 2011-11-04 09:14:06
一凡8665(金币+1): 2011-11-16 16:51:59
模板和引物没有结合原因很多,但主要的原因是退火温度有点高,使模板和引物没有没有配对,做实验时有时看着经典步骤做了,还是不出结果,这就关键里面还有一个自己的摸索过程,那点自己摸索出来的东西作者一般是不会分享的,
4楼2011-11-04 00:39:11
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