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一凡8665

金虫 (小有名气)

[交流] PCR扩增问题

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大家好!我初次做PCR扩增一个细菌的16Sr DNA，引物和扩增条件都是按照文献来的，但是奇怪的是PCR结束后电泳发现，引物和模板没有结合，这是什么原因呢？谢谢大家的释疑！
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1楼2011-11-03 20:31:41
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hxw321

银虫 (小有名气)
★
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一凡8665(金币+3): 2011-11-16 16:52:13
根据Tm值，做一个温度梯度看看。另外，不同的引物设计软件可能Tm值不一样，还是自己设计的好。
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9楼2011-11-04 10:40:06
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yesucao

木虫 (正式写手)
★
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一凡8665(金币+1): 2011-11-04 09:14:00
一凡8665(金币+4): 2011-11-16 16:51:44
可能的原因：细菌DNA的提取过程中，存在较多的蛋白没有去除干净；加样过程中个人的操作；Taq酶失活，扩增的条件也可是适当的优化一下。分析的原因不多，见谅！！
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2楼2011-11-03 20:51:14
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zhfge

铜虫 (初入文坛)
★
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好吧，你检测过模板么？
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3楼2011-11-03 23:22:23
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张建荣

银虫 (小有名气)
★
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一凡8665(金币+1): 2011-11-04 09:14:06
一凡8665(金币+1): 2011-11-16 16:51:59
模板和引物没有结合原因很多，但主要的原因是退火温度有点高，使模板和引物没有没有配对，做实验时有时看着经典步骤做了，还是不出结果，这就关键里面还有一个自己的摸索过程，那点自己摸索出来的东西作者一般是不会分享的，
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4楼2011-11-04 00:39:11
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