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求助:纯化蛋白遇到包涵体了,尿素怎么用?
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纯化大肠杆菌重组蛋白,遇到包涵体了,超声裂解不能澄清,离心后蛋白全在菌体沉淀里面 低温诱导貌似没什么效果。。。。。。请问大家用什么方法释放出来包涵体呢? 有人用8M尿素处理超声成功破裂包涵体 我的问题是,8M的尿素怎么去掉呢?我们的蛋白是GST标签的,是打算用GST琼脂糖柱子纯化的。。。。我不知道8M的尿素对柱子有没有什么影响呢? |
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btx362237729(金币+3): 非常感谢 2011-10-04 13:36:46
amisking(BioEPI+1): 鼓励应助。 2011-10-04 18:51:24
amisking(BioEPI+1): 鼓励应助。 2011-10-04 18:51:24
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上柱之前先进行包涵体的复性 (1)将溶解的包涵体装入已经处理好的透析袋中,封好口,。 (2)放于4℃复性缓冲液中进行梯度复性,间隔时间为10-12h,复性缓冲液的浓度分别为:4.5mmol/L、3.5mmol/L、2.5mmol/L、1.5mmol/L、0.5mmol/L、0mmol/L。 (3)取出复性后的蛋白溶液12000rpm离心20min,取上清,分别取少量的上清和少许的沉淀进行SDS-PAGE,检测复性情况。 复性缓冲液:PBS 1mmol/LEDTA +尿素 |
2楼2011-10-04 13:16:47
3楼2011-10-04 13:17:59
4楼2011-10-04 13:30:32
5楼2011-10-04 15:09:14
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7楼2011-10-05 09:11:47
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11楼2012-04-27 17:17:53
12楼2012-04-27 19:11:10
13楼2012-04-28 13:09:07
danbomingyue
禁虫 (正式写手)
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14楼2012-05-10 09:14:44
15楼2012-05-10 11:24:57
16楼2012-05-12 21:34:00
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花生剥了壳
复性的过程太费时间了
恩啊 也许只能这样干了。。。。。。。。。