应《网络安全法》要求，自2017年10月1日起，未进行实名认证将不得使用互联网跟帖服务。为保障您的帐号能够正常使用，请尽快对帐号进行手机号验证，感谢您的理解与支持！

24小时热门版块排行榜    

小木虫论坛-学术科研互动平台 » 生物医药区 » 生物科学 » 求助：纯化蛋白遇到包涵体了，尿素怎么用？
51/1返回列表
查看: 4206  |  回复: 17
只看楼主 @他人 存档 新回复提醒 (忽略) 收藏    在APP中查看
本帖产生 1 个 BioEPI ，点击这里进行查看
当前只显示满足指定条件的回帖，点击这里查看本话题的所有回帖

btx362237729

金虫 (正式写手)

[交流] 求助：纯化蛋白遇到包涵体了，尿素怎么用？

纯化大肠杆菌重组蛋白，遇到包涵体了，超声裂解不能澄清，离心后蛋白全在菌体沉淀里面

低温诱导貌似没什么效果。。。。。。请问大家用什么方法释放出来包涵体呢？

有人用8M尿素处理超声成功破裂包涵体

我的问题是，8M的尿素怎么去掉呢？我们的蛋白是GST标签的，是打算用GST琼脂糖柱子纯化的。。。。我不知道8M的尿素对柱子有没有什么影响呢？
回复此楼

» 本帖已获得的红花（最新10朵）

花生剥了壳 XXXX1997

» 猜你喜欢

» 本主题相关价值贴推荐，对您同样有帮助:

» 抢金币啦！回帖就可以得到:

查看全部散金贴
1楼 2011-10-04 13:12:26
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

btx362237729

金虫 (正式写手)
引用回帖:
9楼: Originally posted by youngker918 at 2011-10-05 20:10:50:
你可以先透析去除尿素再过柱子的

恩啊 也许只能这样干了。。。。。。。。。
赞一下 回复此楼
10楼2011-10-05 23:45:35
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答

18853850850

金虫 (正式写手)
btx362237729(金币+3): 非常感谢 2011-10-04 13:36:46
amisking(BioEPI+1): 鼓励应助。 2011-10-04 18:51:24
上柱之前先进行包涵体的复性
（1）将溶解的包涵体装入已经处理好的透析袋中，封好口，。
（2）放于4℃复性缓冲液中进行梯度复性，间隔时间为10-12h，复性缓冲液的浓度分别为：4.5mmol/L、3.5mmol/L、2.5mmol/L、1.5mmol/L、0.5mmol/L、0mmol/L。
（3）取出复性后的蛋白溶液12000rpm离心20min，取上清，分别取少量的上清和少许的沉淀进行SDS-PAGE，检测复性情况。
复性缓冲液：PBS 1mmol/LEDTA +尿素
赞一下(2人) 回复此楼
2楼2011-10-04 13:16:47
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

18853850850

金虫 (正式写手)
就是用透析法去除尿素。
赞一下 回复此楼
3楼2011-10-04 13:17:59
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖

btx362237729

金虫 (正式写手)
★ ★ ★ ★
amisking(金币+4): 鼓励应助。 2011-10-04 18:51:31
复性缓冲液的浓度分别为：4.5mmol/L、3.5mmol/L、2.5mmol/L、1.5mmol/L、0.5mmol/L、0mmol/L。

复性缓冲液：PBS 1mmol/LEDTA +尿素

抱歉这个浓度没看懂呢，是指的尿素的浓度吗？

听说尿素处理后GST标签蛋白的结构被破坏得很严重，复性效果也不好，不知道是不是真的？

复性就指去除尿素，然后蛋白质自己折叠？导师说我们这个蛋白就是个直的，不需要折叠，那么主要就要复性GST了
赞一下(1人) 回复此楼
4楼2011-10-04 13:30:32
已阅   回复此楼   关注TA 给TA发消息 送TA红花 TA的回帖
查看全部 18 个回答
普通表情 龙 兔 虎 猫 高级回复 (可上传附件)
最具人气热帖推荐 [查看全部] 作者 回/看 最后发表
[考研] 296求调剂 +5 大口吃饭 身体健 2026-03-13 5/250 2026-03-17 21:05 by 不惑可乐
[考研] 材料，纺织，生物（0856、0710），化学招生啦 +3 Eember. 2026-03-17 7/350 2026-03-17 20:20 by 花125533
[考研] 277调剂 +5 自由煎饼果子 2026-03-16 6/300 2026-03-17 19:26 by 李leezz
[考研] 293求调剂 +7 zjl的号 2026-03-16 12/600 2026-03-17 18:22 by 重科小霸王
[考研] 268求调剂 +8 一定有学上- 2026-03-14 9/450 2026-03-17 17:47 by laoshidan
[考研] 0703化学336分求调剂 +4 zbzihdhd 2026-03-15 5/250 2026-03-17 17:33 by ruiyingmiao
[考研] 材料工程专硕调剂 +5 204818@lcx 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:27 by Little-xue
[硕博家园] 湖北工业大学 生命科学与健康学院-课题组招收2026级食品/生物方向硕士 +3 1喜春8 2026-03-17 5/250 2026-03-17 17:18 by ber川cool子
[考研] 考研化学学硕调剂，一志愿985 +4 张vvvv 2026-03-15 6/300 2026-03-17 17:15 by ruiyingmiao
[考研] 0854可跨调剂，一作一项核心论文五项专利，省、国级证书40+数一英一287 +3 小李0854 2026-03-16 3/150 2026-03-17 13:40 by 热情沙漠
[考研] 药学383 求调剂 +3 药学chy 2026-03-15 4/200 2026-03-16 20:51 by 元子^0^
[考研] 333求调剂 +3 文思客 2026-03-16 7/350 2026-03-16 18:21 by 文思客
[考研] 0703化学调剂 +6 妮妮ninicgb 2026-03-15 9/450 2026-03-16 16:40 by houyaoxu
[考研] 308 085701 四六级已过求调剂 +7 温乔乔乔乔 2026-03-12 14/700 2026-03-14 10:49 by JourneyLucky
[考研] 330求调剂 +3 ?酱给调剂跪了 2026-03-13 3/150 2026-03-14 10:13 by JourneyLucky
[基金申请] 有必要更换申报口吗 20+3 fannyamoy 2026-03-11 3/150 2026-03-14 00:52 by zhanghaozhu
[考研] 0703，333分求调剂 一志愿郑州大学-物理化学 +3 李魔女斗篷 2026-03-11 3/150 2026-03-13 22:24 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +9 咪咪空空 2026-03-12 9/450 2026-03-13 22:05 by 星空星月
[考研] 290求调剂 +9 ADT 2026-03-11 9/450 2026-03-13 21:55 by JourneyLucky
[考研] 材料工程调剂 +4 咪咪空空 2026-03-11 4/200 2026-03-13 19:57 by JourneyLucky
信息提示
关闭
请填处理意见
关闭